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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
X33用pPICZαA表達蛋白都是胞內，不能分泌到胞外是什么原因？ 已有1人參與
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我表達的蛋白，用的X33菌株，pPICZαA載體，然后我的基因序列是沒有跨膜區(qū)域的，基因本身攜帶的信號肽也去掉了。照理說應該是胞外分泌表達，但是檢測表達上清，上清要不就是沒條帶，要不就是有目的條帶，但是檢測到的酶活非常低，和空白相差無幾，無法判斷到底有沒有表達出目的酶，而且拿上清條帶做western也做不出來，western用的就是抗His的。 但是酵母沉淀超聲破碎的上清里就有目的條帶，而且酶活挺強的，western也能做出來。到底是因為什么原因導致它分泌不出來呢，我的蛋白大小是100kDa和90kDa，100kDa的有五個亞基，90kDa的有四個亞基，是不是因為太大了所以分泌不出來？還是分泌到胞外的時候折疊出錯了呢？ |
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2樓2016-05-16 19:36:43
ggyy0911
鐵蟲 (正式寫手)
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3樓2016-05-17 10:19:00
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