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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
X33用pPICZαA表達(dá)蛋白都是胞內(nèi)，不能分泌到胞外是什么原因？ 已有1人參與
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我表達(dá)的蛋白，用的X33菌株，pPICZαA載體，然后我的基因序列是沒有跨膜區(qū)域的，基因本身攜帶的信號(hào)肽也去掉了。照理說(shuō)應(yīng)該是胞外分泌表達(dá)，但是檢測(cè)表達(dá)上清，上清要不就是沒條帶，要不就是有目的條帶，但是檢測(cè)到的酶活非常低，和空白相差無(wú)幾，無(wú)法判斷到底有沒有表達(dá)出目的酶，而且拿上清條帶做western也做不出來(lái)，western用的就是抗His的。 但是酵母沉淀超聲破碎的上清里就有目的條帶，而且酶活挺強(qiáng)的，western也能做出來(lái)。到底是因?yàn)槭裁丛驅(qū)е滤置诓怀鰜?lái)呢，我的蛋白大小是100kDa和90kDa，100kDa的有五個(gè)亞基，90kDa的有四個(gè)亞基，是不是因?yàn)樘罅怂苑置诓怀鰜?lái)？還是分泌到胞外的時(shí)候折疊出錯(cuò)了呢？ |
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5樓2017-12-05 15:11:41
粒粒分明
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2樓2016-05-16 19:36:43
ggyy0911
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3樓2016-05-17 10:19:00
cymstory
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