 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3289 | 回復(fù): 25 | ||
[求助]
PCR一直跑不出來，排除了該排除的原因了還是跑不出來 已有7人參與
|
||
| 我最近在提取黑曲霉基因組DNA，克隆特定的葡萄糖氧化酶基因，但我的菌株是菌種保藏中心購買的標準菌株，不是克隆我需要的特定基因的特定菌株，我開始提的RNA，再反轉(zhuǎn)錄成CDNA跑PCR,退火溫度跑的是55-65℃的梯度，用的10微升體系，沒跑出來，后來又提的DNA,同樣是跑的溫度梯度，我需要的目的基因是1818bp，所以用的是高保真酶，引物也設(shè)計了好幾對了，都是公司幫設(shè)計的，應(yīng)該沒問題，CDNA和DNA的濃度以及OD值都正常，但是不管用什么方法都跑不出來，求大神啊，真不知道該怎么辦了，試驗就卡在第一步了，好焦心吶�。。。�！電泳圖上除了marker就什么都沒有了，有時候有引物二聚體 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有278人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
yesucao
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 51 (初中生)
- 金幣: 3877.1
- 散金: 45
- 紅花: 6
- 帖子: 374
- 在線: 203.4小時
- 蟲號: 810829
- 注冊: 2009-07-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+3, 贈人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。myprayer祝您科研順利，文章多多。 2016-06-01 22:27:08
xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-07-17 08:03:46
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+3, 贈人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。myprayer祝您科研順利，文章多多。 2016-06-01 22:27:08
xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-07-17 08:03:46
|
一般這種常見的基因沒必要自己設(shè)計引物，搜索相關(guān)的文獻均可以查找到設(shè)計好且條件成熟的引物，核對一下引物序列和擴增條件，沒有問題就可以采用，我查找到的網(wǎng)站鏈接如下：http://www.docin.com/p-1350669733.html； 僅供樓主參考，以DNA為模板，建議反應(yīng)體系加大到30ul，畢竟PCR擴增產(chǎn)物還是需要測序驗證一下才行。 |
6樓2016-06-01 22:07:46
2樓2016-06-01 15:34:52
3樓2016-06-01 15:42:47
4樓2016-06-01 15:45:01
5樓2016-06-01 15:46:30
7樓2016-06-02 10:20:29
8樓2016-06-02 11:46:47
tangbowen
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1273.1
- 帖子: 281
- 在線: 12.3小時
- 蟲號: 3437121
- 注冊: 2014-09-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物化學保護
9樓2016-06-02 11:57:02
030Selma
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 19 (小學生)
- 金幣: 1228.4
- 散金: 27
- 紅花: 7
- 帖子: 528
- 在線: 47.7小時
- 蟲號: 2394318
- 注冊: 2013-04-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 食品科學基礎(chǔ)
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-06-04 22:07:21
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-06-04 22:07:21
|
先換酶試試，高保真也有不同品牌~或者先用非高保真的看能不能擴出來，還不能可能就是模板問題了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
10樓2016-06-02 12:20:11
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 lanwang 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 學碩274求調(diào)劑 +12 | Li李魚 2026-03-26 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +5 | 小張zxy張 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +12 | j的立方 2026-03-29 | 12/600 |
|
|
[考研] 367求調(diào)劑 +5 | 芋泥啵�！� 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +12 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | @MZB382400 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學，材料工程（085601） +5 | 小小機靈蟲 2026-03-29 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +8 | 星野? 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +11 | wulanna 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 294分080500材料科學與工程求調(diào)劑 +8 | 柳溪邊 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+11
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 好好讀書。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | L when 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|