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小李紙11銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞(大腸桿菌DH5α)后陽性克隆的篩選 已有4人參與
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| 求助,將目的片段和載體(酶切并純化后的)進(jìn)行連接反應(yīng),然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,如果連接不成功,那單獨(dú)的目的片段或單獨(dú)的載體片段能導(dǎo)入到感受態(tài)細(xì)胞中嗎?如果能導(dǎo)入的話,導(dǎo)入后的宿主菌能正常生長嗎? |
銀蟲 (初入文壇)
木蟲 (正式寫手)
| 無論是化轉(zhuǎn)還是電轉(zhuǎn),單獨(dú)的目的片段或單獨(dú)的載體片段都能導(dǎo)入到感受態(tài)細(xì)胞中,需要查看你用的是單酶切還是雙酶切了。若雙酶切,單獨(dú)的片段無法復(fù)制,所以在宿主菌中無法生長;若是單酶切,且未去磷酸化,載體會出現(xiàn)自連,在宿主菌中出現(xiàn)空載的情況。 |
金蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
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