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[求助]
基因克隆求助 已有1人參與
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用高保真酶克一段序列，前面兩次跑出來序列很清楚，第一張為前面兩次，但是連接轉(zhuǎn)化菌液監(jiān)測都沒有目的條帶，之后又用普通酶拉條帶以及用高保真酶跑，但是就是跑不出原來的條帶了，第二張是跑不出來的結(jié)果。能請牛人給點(diǎn)意見唄 @biostar2009 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2016-06-02 20:06:26
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-06-24 07:46:40
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用高保真酶擴(kuò)增一般沒有a尾，樓主用的什么克隆載體。拉基因的模版是什么？第二次是否模板反復(fù)凍融有降解 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2016-06-02 22:48:22
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-06-24 07:47:03
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樓主糾結(jié)這個問題前，是要先確定你的克隆或者模板是否攜帶了你的目的基因。你克隆菌液做pcr檢測，目的就是為了驗證這個克隆是否正確么？如果是這個目的話，出現(xiàn)擴(kuò)增不出來的情況很正常呀，畢竟會出現(xiàn)空載假陽性的。另一種可能就是菌液pcr準(zhǔn)確度不高，你可以提質(zhì)粒做pcr和酶切驗證，如果還沒有目的條帶，那就證明你這個克隆子是錯誤的呀，出現(xiàn)擴(kuò)增不出來也就屬于正常現(xiàn)象了，祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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9樓2016-06-23 20:26:25
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-06-24 07:47:27
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你做菌液pcr用的是什么引物呢？特異性引物還是通用性引物，如果通用引物可以做一個對照，看看非特異性條帶是不是在其他菌中也存在，另外可以用你目的條帶特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增檢測。當(dāng)然我還是認(rèn)為菌液pcr結(jié)果僅供參考，你還是要依賴提質(zhì)粒做酶切，和后面的測序分析才可以，祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-06-23 20:42:23
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