 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 層析/純化 » 自己的初次蛋白純化實驗
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1202 | 回復: 6 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
zy晨曦新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
自己的初次蛋白純化實驗 已有2人參與
|
||
|
通過上一次的蛋白純化，發(fā)現(xiàn)酶活的回收率低（目前沒有著重考察純度的問題），所以今天通過降低ph來考察酶活的回收率的問題。通過一天的不間斷的實驗，發(fā)現(xiàn)降低ph能快速洗脫目的蛋白，但是純化還沒有測定。先說說具體的步驟吧。 首先調(diào)整了弱陰離子樹脂的ph為7.0，還是將樹脂倒出然后直接調(diào)ph的方法，粗糙而又快速的方法。 調(diào)整酶液的ph有點問題，因為利用3M鹽酸調(diào)整會出現(xiàn)渾濁，主要是因為強酸會導致局部ph過低，酶變性了。所以我利用0.05m的磷酸氫二鉀調(diào)整ph。成功。 上柱300ml，比上次的柱子上的酶液體積多了100ml，但是酶活略微低于上一個酶液�？傮w算來，兩者的上樣量差不多。但是洗脫規(guī)律卻差了很多 0.2m氯化鈉就能洗脫出30%的目的蛋白，0.3m氯化鈉在第一個0.5BV時就洗脫出45%的目的蛋白，雖然心里在懷疑這個ph不適合，但是畢竟洗脫出來的酶活高，濃度大，接著0.3M洗脫的第二個0.5BV就沒有酶活了，說明洗脫過快。如果可以下次應該改用0.25M洗脫了。接下來的0.4M就沒有洗脫出來蛋白�；驹�0.3M就洗脫出來了全部的蛋白，但是還是有20%左右的酶活不知道在哪里？酶在和我玩捉迷藏，而樹脂一直幫著它，我是孤家寡人了。 |
回復此樓» 猜你喜歡
材料調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
311（085601）求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
307分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復
-
085601英二數(shù)二求調(diào)劑 總分325
已經(jīng)有3人回復
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
生醫(yī)工0831調(diào)劑求推薦
已經(jīng)有6人回復
-
生物學296求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復
-
一志愿武理材料工程302調(diào)劑環(huán)化或化工
已經(jīng)有4人回復
-
286分調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復
-
復試調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 轉(zhuǎn)染實驗要注意的一些問題
已經(jīng)有8人回復
- 關于提純小分子多肽pyoverdines除鹽的問題
已經(jīng)有7人回復
zy晨曦
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2258.4
- 散金: 10
- 紅花: 1
- 帖子: 205
- 在線: 77.5小時
- 蟲號: 1755080
- 注冊: 2012-04-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
送紅花一朵 
4樓2016-06-11 20:03:55
hc-material
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗: +702 - BioEPI: 1
- 應助: 517 (博士)
- 金幣: 462.9
- 散金: 18028
- 紅花: 313
- 帖子: 3594
- 在線: 518.8小時
- 蟲號: 4027804
- 注冊: 2015-08-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 核技術及其應用
- 管轄: 生物科學
2樓2016-06-07 10:09:46
璧月
捐助貴賓 (正式寫手)
- 應助: 21 (小學生)
- 金幣: 4908.9
- 散金: 250
- 紅花: 3
- 帖子: 424
- 在線: 164.7小時
- 蟲號: 158806
- 注冊: 2006-01-07
- 性別: MM
- 專業(yè): 細胞生理學
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
沒弄明白為什么把填料弄出來換ph環(huán)境？離子交換兩種洗脫方法，鹽洗脫和ph洗脫。鹽是改變環(huán)境電導，ph是改變蛋白帶電。直接往柱子里泵緩沖液就可以的，為什么要拆出來呢？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2016-06-09 14:22:51
zy晨曦
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2258.4
- 散金: 10
- 紅花: 1
- 帖子: 205
- 在線: 77.5小時
- 蟲號: 1755080
- 注冊: 2012-04-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學
5樓2016-06-11 20:07:00
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601英二數(shù)二求調(diào)劑 總分325 +3 | 余航航 2026-03-31 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 生醫(yī)工0831調(diào)劑求推薦 +4 | 小熊睿睿_s 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 復試調(diào)劑 +3 | 雙馬尾痞老板2 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +12 | wulanna 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
[考研] 求收留 +8 | 1943443204 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 不挑專業(yè) 求收留 +4 | Yam. 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0710生物學求調(diào)劑！ +4 | 敘述文 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國科學院大學265求調(diào)劑 +6 | 恬淡ye 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑 +6 | 大饞小子 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學279求調(diào)劑 +7 | 哈哈哈^_^ 2026-03-31 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +6 | 曲聽筠 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +11 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機化學考研356分 +10 | Nadiums 2026-03-25 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +10 | 彼岸t 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來財aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 汲亦昊 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪！？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|