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sdjnyxn123銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)蛋白鎳柱純化之后，elution buffer洗脫下來(lái)的蛋白跟之前沒(méi)什么區(qū)別是怎么回事 已有5人參與
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是生工的這種鎳柱 先用bind/wash buffer平衡2h 之后加入樣品（大腸桿菌細(xì)胞破碎后的上清），靜置半小時(shí)后，流出的液體是右邊第二個(gè)泳道的 然后wash buffer洗脫兩次 最后加入elution buffer，靜置半小時(shí)后得到純化樣品 3個(gè)樣品分別進(jìn)行了SDS-PAGE看了一下 結(jié)果發(fā)現(xiàn)基本上沒(méi)有什么太大的變化，還是那些雜蛋白 試劑盒時(shí)間有點(diǎn)長(zhǎng)，14年買(mǎi)的，但是我再生過(guò)，不過(guò)bind/wash buffer和elution buffer沒(méi)有處理過(guò) 是這兩個(gè)的問(wèn)題嗎？ 一直純化不成功，很苦惱，希望知道的朋友能夠幫助一下！非常感謝！ |
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| 原因有很多，可以看文章：蛋白純化經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：http://www.detaibio.com/topics/qin-he-chun-hua-faq.html |
2樓2016-06-20 17:17:14
原海亮
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-06-25 08:43:33
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你沒(méi)有做梯度洗脫么，可以優(yōu)化一下洗脫條件，盡量分離開(kāi)不同蛋白 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2016-06-20 17:30:04
hc-material
專(zhuān)家顧問(wèn) (職業(yè)作家)
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專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +702 - 應(yīng)助: 517 (博士)
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4樓2016-06-21 10:22:33
了了5123
金蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2016-06-21 14:43:13
tmoonday
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-06-25 08:45:56
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自己做梯度，咪坐濃度，40，100，150，200，250.試試，不用靜置，直接洗脫，收集 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2016-06-23 00:10:21
XMC-7
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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- 專(zhuān)業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
7樓2016-06-24 17:38:28
夏天的普洱茶
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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8樓2016-06-25 00:49:26
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-06-25 08:46:14
西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-06-25 08:46:14
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his標(biāo)簽很麻煩的，最基礎(chǔ)的純化而已，不要以為可以純得多干凈，但也不至于這樣子，先搞個(gè)梯度試試，剩下兩三條雜帶后可以用切g(shù)el的方法，his不可能純的 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
9樓2016-06-25 01:26:24
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生工的柱子太差了，起碼用novagen，GE的，最好用伯樂(lè)的，柱子分得更細(xì)，雜帶去得更干凈，wash buffer 沒(méi)幾條雜帶，這國(guó)產(chǎn)的柱子根本不行 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
10樓2016-06-25 01:30:31
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