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sdjnyxn123銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
請問蛋白鎳柱純化之后，elution buffer洗脫下來的蛋白跟之前沒什么區(qū)別是怎么回事 已有5人參與
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是生工的這種鎳柱 先用bind/wash buffer平衡2h 之后加入樣品（大腸桿菌細(xì)胞破碎后的上清），靜置半小時后，流出的液體是右邊第二個泳道的 然后wash buffer洗脫兩次 最后加入elution buffer，靜置半小時后得到純化樣品 3個樣品分別進(jìn)行了SDS-PAGE看了一下 結(jié)果發(fā)現(xiàn)基本上沒有什么太大的變化，還是那些雜蛋白 試劑盒時間有點長，14年買的，但是我再生過，不過bind/wash buffer和elution buffer沒有處理過 是這兩個的問題嗎？ 一直純化不成功，很苦惱，希望知道的朋友能夠幫助一下！非常感謝！ |
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了了5123
金蟲 (小有名氣)
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5樓2016-06-21 14:43:13
| 原因有很多，可以看文章：蛋白純化經(jīng)驗總結(jié)：http://www.detaibio.com/topics/qin-he-chun-hua-faq.html |
2樓2016-06-20 17:17:14
原海亮
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-06-25 08:43:33
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你沒有做梯度洗脫么，可以優(yōu)化一下洗脫條件，盡量分離開不同蛋白 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-06-20 17:30:04
hc-material
專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗: +702 - 應(yīng)助: 517 (博士)
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4樓2016-06-21 10:22:33
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