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jiafeijiafei金蟲 (小有名氣)
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[求助]
免疫沉淀試驗操作 已有1人參與
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大家好，我最近在做IP實驗，想純化目的蛋白，分子量是57KD。但是因為是新手，不是太懂。有幾個問題想咨詢： 1、抗體的選擇：抗體的效價高低對抗原抗體的結(jié)合效率有影響嗎？還是只單純考慮抗體的濃度？ 2、因為我是要把目的蛋白洗脫下來做液質(zhì)分析，師兄師姐說我這個蛋白會和抗體的重鏈分不開，想知道目的蛋白和抗體對質(zhì)譜分析有影響嗎？一定要用交聯(lián)劑？ |
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kaobo2012
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2樓2016-06-21 22:02:36
jiafeijiafei
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3樓2016-06-21 23:59:19
biocherry
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4樓2016-06-22 18:13:36
jiafeijiafei
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可是抗體分重鏈和輕鏈，重鏈是55kd，洗脫的話不就重合了么？工程師說可以用交聯(lián)劑，把抗體交聯(lián)到磁珠上，這樣洗脫的時候抗體就不會和抗原同時洗脫下來。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-06-22 18:56:18
kaobo2012
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6樓2016-06-22 21:01:16
jiafeijiafei
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對，我現(xiàn)在就是想把蛋白純化出來，經(jīng)過酶解等操作把多肽進液質(zhì)，分析該蛋白有哪些翻譯后修飾。后面的操作我都會，現(xiàn)在的問題就是純化做IP，覺得難做 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-06-22 21:03:26
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