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jiafeijiafei金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
免疫沉淀試驗(yàn)操作 已有1人參與
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大家好，我最近在做IP實(shí)驗(yàn)，想純化目的蛋白，分子量是57KD。但是因?yàn)槭切率�，不是太懂。有幾個(gè)問(wèn)題想咨詢： 1、抗體的選擇：抗體的效價(jià)高低對(duì)抗原抗體的結(jié)合效率有影響嗎？還是只單純考慮抗體的濃度？ 2、因?yàn)槲沂且涯康牡鞍紫疵撓聛?lái)做液質(zhì)分析，師兄師姐說(shuō)我這個(gè)蛋白會(huì)和抗體的重鏈分不開(kāi)，想知道目的蛋白和抗體對(duì)質(zhì)譜分析有影響嗎？一定要用交聯(lián)劑？ |
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1.免疫沉淀實(shí)驗(yàn)用的抗體，一般要看親和力。親和力太高，不利于洗脫。親和力太弱，不利于目的蛋白的收集。如果你是買的抗體，就看看說(shuō)明書，說(shuō)可以做這個(gè)實(shí)驗(yàn)，那用就可以了。 2.你質(zhì)譜，要打完整分子量，還是氨基酸序列？這個(gè)要講清楚，才能回答你的問(wèn)題。 |
2樓2016-06-21 22:02:36
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4樓2016-06-22 18:13:36
jiafeijiafei
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可是抗體分重鏈和輕鏈，重鏈?zhǔn)?5kd，洗脫的話不就重合了么？工程師說(shuō)可以用交聯(lián)劑，把抗體交聯(lián)到磁珠上，這樣洗脫的時(shí)候抗體就不會(huì)和抗原同時(shí)洗脫下來(lái)。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2016-06-22 18:56:18
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6樓2016-06-22 21:01:16
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對(duì)，我現(xiàn)在就是想把蛋白純化出來(lái)，經(jīng)過(guò)酶解等操作把多肽進(jìn)液質(zhì)，分析該蛋白有哪些翻譯后修飾。后面的操作我都會(huì)，現(xiàn)在的問(wèn)題就是純化做IP，覺(jué)得難做 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2016-06-22 21:03:26
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