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關(guān)于轉(zhuǎn)錄組序列需不需要拿去克隆的問(wèn)題 已有1人參與
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各位大神： 剛開(kāi)始接觸分子，很多都不懂，有個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教一下各位，我?guī)熜秩ツ昴梦覀兊膶?shí)驗(yàn)材料送去測(cè)序，測(cè)得了轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)，我在通路和功能注釋里面找到了跟生長(zhǎng)和免疫相關(guān)的一些基因序列，設(shè)計(jì)了引物，想拿去跑RT-PCR，驗(yàn)證不同處理對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)材料的生長(zhǎng)基因的表達(dá)有沒(méi)有影響，實(shí)驗(yàn)材料定期取樣。因?yàn)槲覀兊牟牧显诜肿舆@塊剛剛開(kāi)始，以前沒(méi)人做過(guò)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，我找的序列不是從NCBI里面直接查到的序列，是自己的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)里面的，內(nèi)參也是自己庫(kù)里的找到的β-actin相關(guān)的序列，引物是https://www.genscript.com/ssl-bin/app/primer這個(gè)網(wǎng)頁(yè)設(shè)計(jì)的，試跑PCR之后，目的基因和內(nèi)參都擴(kuò)出來(lái)了，沒(méi)有非特異性擴(kuò)增二聚體之類的東西，只有一個(gè)峰，pcr產(chǎn)物也只有一條帶，我想問(wèn)的是，如果用自己庫(kù)里的相關(guān)序列發(fā)表論文的話，人家期刊會(huì)不會(huì)不承認(rèn)，認(rèn)為測(cè)出來(lái)的序列不準(zhǔn)確，需不需要拿去克隆，一定要克隆出來(lái)才能承認(rèn)我們的序列是可用的嗎？ 希望各位大神予以解答。 |
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stone2239
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-12 07:31:33
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| 既然擴(kuò)出來(lái)了，且只有一個(gè)峰，直接把PCR產(chǎn)物送測(cè)序，然后把測(cè)序結(jié)果和轉(zhuǎn)錄組結(jié)果比對(duì)一下，確定是你要擴(kuò)的序列，很多期刊要求文章中的序列要有登錄號(hào)，你可以把你測(cè)序驗(yàn)證后序列單另提交到NCBI的genbank數(shù)據(jù)庫(kù)。 |
2樓2016-07-11 19:59:59
3樓2016-07-13 10:04:35
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4樓2016-07-13 14:14:20
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5樓2016-07-13 19:24:30
6樓2016-07-13 19:27:06
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7樓2016-07-14 00:34:28
8樓2016-07-18 08:26:43
9樓2016-07-18 08:27:02
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