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bb123456789金蟲 (正式寫手)
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[交流]
預(yù)測膜蛋白的原核表達
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| 最近，在做一個基因的功能驗證。通過前期的實驗發(fā)現(xiàn)，該基因有兩個不同的isoforms，一個不含信號肽及跨膜域（P1），另外一個（P2）N端比P1對30個aa，含有信號肽同時N端含有跨膜結(jié)構(gòu)域（1-5aa在胞內(nèi)，6-29aa跨膜）。原核表達時（載體用的pET28a），P1能成功誘導(dǎo)出來為可溶形式，但P2無法誘導(dǎo)。在做誘導(dǎo)前，對P1做了截短實驗，截短的片段無法誘導(dǎo)出目的蛋白。P2在預(yù)測的起始密碼子下游15個核苷酸之后還存在一個起始密碼子，目前，我擔心是不是P2的起始密碼子不對，所以無法誘導(dǎo)表達或者是不是真核生物中的膜蛋白在原核中本身就比較難表達呢？于此，想請教有經(jīng)驗的蟲友指點一下，下一步該怎么做呢？謝謝。 |
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2樓2016-07-15 13:22:42
xuweitao
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2016-07-18 08:30:36
bb123456789
金蟲 (正式寫手)
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4樓2016-07-20 14:21:58
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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5樓2018-03-22 15:10:24
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