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想通過5'RACE克隆抗體基因可變區(qū)，用clontech的試劑盒做的，測序結(jié)果看到有擴增到V區(qū)，但是V區(qū)的頭沒有擴到（已經(jīng)排除mRNA降解的可能性） 我推測可能是UPM-short primer與V區(qū)某個部位發(fā)生了錯配，以至于頭部丟失（圖中UPM-S序列的后五位堿基AGGGC恰好與V區(qū)擴增到的最開始的幾個堿基因重合），但奇怪的是在測序結(jié)果中，UPM-S前面一段序列恰好與SMARTer II oligo一致，這就很奇怪了，按照正常情況，SMARTer II應該在UPM-S的后面不是嗎？而如果按照我前面的推測，UPM-short錯配的話，在測序結(jié)果中應該看不到SMARTer II的。 求高手賜教這到底是咋 回事兒？ 圖片1.png |
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