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怡軒小住新蟲 (初入文壇)
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想通過5'RACE克隆抗體基因可變區(qū)，用clontech的試劑盒做的，測序結(jié)果看到有擴(kuò)增到V區(qū)，但是V區(qū)的頭沒有擴(kuò)到（已經(jīng)排除mRNA降解的可能性） 我推測可能是UPM-short primer與V區(qū)某個(gè)部位發(fā)生了錯(cuò)配，以至于頭部丟失（圖中UPM-S序列的后五位堿基AGGGC恰好與V區(qū)擴(kuò)增到的最開始的幾個(gè)堿基因重合），但奇怪的是在測序結(jié)果中，UPM-S前面一段序列恰好與SMARTer II oligo一致，這就很奇怪了，按照正常情況，SMARTer II應(yīng)該在UPM-S的后面不是嗎？而如果按照我前面的推測，UPM-short錯(cuò)配的話，在測序結(jié)果中應(yīng)該看不到SMARTer II的。 求高手賜教這到底是咋 回事兒？ 圖片1.png |
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3樓2018-06-27 06:49:54
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4樓2018-06-27 08:32:41
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