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化蝶為誰舞新蟲 (初入文壇)
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[求助]
空載體雙酶切，出現(xiàn)兩天帶
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空載體大概是8000bp左右，雙酶切后有的出現(xiàn)單條帶，有的出現(xiàn)了兩天帶，不理解，求蟲友解惑，對(duì)做了同樣的雙酶切的目的條帶進(jìn)行了T4連接酶連接，轉(zhuǎn)化涂板都是一個(gè)菌落都沒長，重復(fù)了三次。仍然是一個(gè)菌落都沒長。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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化蝶為誰舞
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2樓2016-08-11 09:24:57
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你首先要確定你的空載體是否正確，空載體酶切膠回收后，需要再次跑電泳確認(rèn)你是否回收成功，然后再去做T4連接。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-08-11 11:35:03
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5樓2016-08-11 13:04:45
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6樓2016-08-11 20:21:57
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兩個(gè)酶切位點(diǎn)之間只有幾十個(gè)bp,但是切后有八千和一個(gè)兩千多的就比較奇怪了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-08-11 23:33:21
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那你多做幾個(gè)樣品來酶切，最終回收到一個(gè)EP管里面，酶切后的空載體濃度最高在15ng/ul以上，最后做連接是才容易連上。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-08-12 01:55:00
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酶切載體最好過夜酶切，如果切得不徹底，會(huì)導(dǎo)自載體自連。通常酶切載體是20微升體系中酶切1ug的載體質(zhì)粒，做4-6個(gè)重復(fù)，酶切后用50微升的大孔點(diǎn)樣回收，且最好加公司贈(zèng)送的10Xloading buffer，在跑電泳時(shí)有利于DNA的沉降，自己配的6Xloading bufferwe 可以，但效果沒有那么好。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-08-12 02:02:45
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10樓2016-08-12 23:17:09
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