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空載體雙酶切,出現(xiàn)兩天帶
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空載體大概是8000bp左右,雙酶切后有的出現(xiàn)單條帶,有的出現(xiàn)了兩天帶,不理解,求蟲友解惑,對做了同樣的雙酶切的目的條帶進行了T4連接酶連接,轉化涂板都是一個菌落都沒長,重復了三次。仍然是一個菌落都沒長。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
木蟲 (小有名氣)
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酶切載體最好過夜酶切,如果切得不徹底,會導自載體自連。通常酶切載體是20微升體系中酶切1ug的載體質粒,做4-6個重復,酶切后用50微升的大孔點樣回收,且最好加公司贈送的10Xloading buffer,在跑電泳時有利于DNA的沉降,自己配的6Xloading bufferwe 可以,但效果沒有那么好。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲 (小有名氣)
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你首先要確定你的空載體是否正確,空載體酶切膠回收后,需要再次跑電泳確認你是否回收成功,然后再去做T4連接。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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