 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1533 | 回復: 3 | ||
anyeout新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
真菌PKS NPRS基因篩選 已有2人參與
|
| 本人是做微生物天然產物的新手，發(fā)現(xiàn)文獻中有很多關于放線菌中PKS、NPRS基因的篩選，但是有關真菌PKS、NPRS的篩選很少，想請問各位蟲友，可否用PCR方法對真菌中這兩種基因進行篩選？引物是什么？放線菌和真菌中編碼這兩種酶的基因一樣嗎？ |
回復此樓» 猜你喜歡
299求調劑
已經(jīng)有8人回復
-
一志愿北京理工大學本科211材料工程294求調劑
已經(jīng)有6人回復
-
300求調劑，材料科學英一數(shù)二
已經(jīng)有8人回復
-
招收生物學/細胞生物學調劑
已經(jīng)有5人回復
-
070305高分子化學與物理 304分求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
289求調劑
已經(jīng)有13人回復
-
一志愿哈爾濱工業(yè)大學材料與化工方向336分
已經(jīng)有9人回復
-
081200-11408-276學碩求調劑
已經(jīng)有6人回復
-
調劑求院校招收
已經(jīng)有5人回復
-
調劑310
已經(jīng)有8人回復
caozhichun
銀蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 511
- 散金: 20
- 帖子: 31
- 在線: 59.1小時
- 蟲號: 1445752
- 注冊: 2011-10-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
2樓2016-08-15 11:45:54
anyeout
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 93.7
- 散金: 3
- 帖子: 37
- 在線: 28.4小時
- 蟲號: 964921
- 注冊: 2010-03-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 天然藥物化學
3樓2016-08-16 09:29:25
starybirds
捐助貴賓 (初入文壇)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 54.5
- 散金: 100
- 帖子: 15
- 在線: 5.5小時
- 蟲號: 4870612
- 注冊: 2016-07-26
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
【答案】應助回帖
|
上網(wǎng)給你找的，基因篩選的方法： 1、從基因文庫中獲得目的基因. 方法： 第一步,通過PCR方法將目的基因已知的部分核苷酸序列擴增出來,進行放射性同位素標記（也可以用別的標記方法進行,如生物素、熒光素等）,即用標記了放射性同位素的目的DNA片段作為探針,與擴增出來的DNA雜交. 第二步,將基因文庫中的所有菌落轉移至硝酸纖維膜上（也可以用其他類型的膜）,然后,通過處理溶解消化掉細菌中的蛋白質,并使DNA固定在膜上. 第三步,按Southern雜交的方法進行雜交. 第四步,在X光底片上出現(xiàn)黑斑的菌落,這表明這個菌落中含有所需要的目的基因（若選用別的標記方法,有陽性信號的菌落則含有所需要的目的基因）. 第五步,從該菌落中再提取目的基因. 2、PCR 篩選法方法： 第一步：將反應體系（包括雙鏈模板、引物、耐高溫的DNA聚合酶、四種脫氧核糖核苷酸以及酶促反應所需的離子等）加熱至90～95 ℃,使雙鏈DNA模板兩條鏈之間的氫鍵打開,變成單鏈DNA,作為互補鏈聚合反應的模板. 第二步：將反應體系降溫至55～60 ℃,使兩種引物分別與模板DNA鏈3′端的互補序列互補配對,這個過程稱為復性. 第三步：將反應體系升溫至70～75 ℃,在耐高溫的DNA聚合酶催化作用下,將與模板互補的單個核苷酸加到引物所提供的3-OH上,使DNA鏈延伸,產生一條與模板鏈互補的DNA鏈. 上述三步反應完成后,一個DNA分子就變成了兩個DNA分子,隨著重復次數(shù)的增多,DNA分子就以2n的形式增加.PCR的反應過程都是在PCR擴增儀中完成的. 3、核酸雜交法、 DNA和DNA分子之間的雜交.目的基因是否整合到受體生物的染色體DNA中,這在真核生物中是目的基因可否穩(wěn)定存在和遺傳的關鍵.如何證明這一點,就需要通過Southern雜交技術.基本做法是： 第一步,將受體生物DNA提取出來,經(jīng)過適當?shù)拿盖泻?走瓊脂糖凝膠電泳,將不同大小的片段分開； 第二步,將凝膠上的DNA片段轉移到硝酸纖維素膜上； 第三步,用標記了放射性同位素（或生物素）的目的DNA片段作為探針與硝酸纖維素膜上的DNA進行雜交； 第四步,將X光底片壓在硝酸纖維素膜上,在暗處使底片感光； 第五步,將X光底片沖洗,如果在底片上出現(xiàn)黑色條帶,則表明受體植物染色體DNA上有目的基因. 4、免疫篩選法 Western雜交──蛋白質分子（抗原—抗體）之間的雜交.它是檢測目的基因是否表達出蛋白質的一種方法.具體做法是： 第一步,將目的基因在大腸桿菌中表達出蛋白質； 第二步,將表達出的蛋白質注射動物進行免疫,產生相應的抗體,并提取出抗體（一抗）； 第三步,從轉基因生物中提取蛋白質,走凝膠電泳； 第四步,將凝膠中的蛋白轉移到硝酸纖維素膜上； 第五步,將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交,這時抗體（一抗）與目的基因表達的蛋白（抗原）會特異結合.由于這種抗原—抗體的結合顯示不出條帶,所以加入一種稱為二抗的抗體,它可以與一抗結合,二抗抗體上帶有特殊的標記.如果目的基因表達出了蛋白質,則結果為陽性. |
4樓2016-08-18 20:36:17
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 anyeout 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 本科雙非材料，跨考一志愿華電085801電氣，283求調劑，任何專業(yè)都可以 +6 | 芝士雪baoo 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華北電力大學能動專碩，293，求調劑 +3 | 15537177284 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 藥學105500求調劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 張芳銘-中國農業(yè)大學-環(huán)境工程專碩-298 +4 | 手機用戶 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 275求調劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調劑 +10 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 298調劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327求調劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學 296 求調劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 352求調劑 +4 | 大米飯！ 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085602 289分求調劑
+8
|
WWW西西弗斯 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 303求調劑 +6 | 藍山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡空間安全0839招調劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料調劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 344求調劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|