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Yuanfang_818金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助，雙酶切 已有4人參與
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各位道友，我將2000bp的片段插入到pET-32a中，然后雙酶切，電泳只有4000和7000之間，有一條帶，估計是32a的5900大小，沒有2000的目的條帶。怎么回事？我驗證過質(zhì)粒，電泳在5000多，準(zhǔn)備跑PCR再驗證一下。問題只有質(zhì)粒嗎，還有沒有別的原因啊。求教！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2016-08-30 16:03:13
Yuanfang_818
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-01 08:26:42
xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-09-01 08:26:42
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第一，提取的質(zhì)粒，我重新跑PCR，有目的片段，說明片段連進(jìn)去了，質(zhì)粒沒問題。第二，我覺得質(zhì)粒沒有切開，因為之前我提取的質(zhì)粒，跑電泳，片段也在5000多，我估計和32a的5900差不多，電泳區(qū)分不開。第三，我的酶切體系是50微升的，兩種酶各加了1和2微升，質(zhì)粒共加了1500ng，酶切了5個小時。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-08-30 21:14:13
4樓2016-08-30 23:59:58
Yuanfang_818
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5樓2016-08-31 01:55:31
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7樓2016-09-01 13:35:23
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8樓2016-09-01 13:37:34
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