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ysk1989
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[交流]
如何成功轉(zhuǎn)染siRNA 已有1人參與
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1.設(shè)計(jì)合成有效的siRNA RNAi的核心需要 siRNA對(duì)相應(yīng)mRNA進(jìn)行有效的結(jié)合和作用。siRNA的設(shè)計(jì)合成首先很重要，最優(yōu)的設(shè)計(jì)可以用最小的工作濃度取得滿意的沉 默效果，減少副反應(yīng)的發(fā)生。siRNA的設(shè)計(jì)可以通過檢索,優(yōu)先選用經(jīng)過驗(yàn)證的siRNA或設(shè)計(jì)多對(duì)siRNA。需要強(qiáng)調(diào)的是，需要同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照以排 除非特異沉默現(xiàn)象和陽(yáng)性對(duì)照以確認(rèn)整個(gè)實(shí)驗(yàn)體系的有效性。 2.合成的siRNA注意純度和工作濃度 siRNA的合成需要注意的是一定要選用高純度的siRNA，siRNA的純度直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率和沉默效率。siRNA的工作濃度和siRNA的設(shè)計(jì)、細(xì)胞種類、目標(biāo)基因有關(guān)。建議一定進(jìn)行相關(guān)的預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化各條件。 3.選擇合適的siRNA轉(zhuǎn)染試劑 選擇合適的 siRNA轉(zhuǎn)染試劑是的RNAi實(shí)驗(yàn)成功另一個(gè)關(guān)鍵。由于細(xì)胞毒性對(duì)siRNA實(shí) 驗(yàn)的影響非常大，可以直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論和結(jié)果，所以一定選擇低毒性的轉(zhuǎn)染試劑，看一個(gè)轉(zhuǎn)染試劑毒性是否低，有一個(gè)簡(jiǎn)單的方法，看轉(zhuǎn)染的過程和要求，比如要 求的細(xì)胞密度越大，說(shuō)明毒性越大，比如轉(zhuǎn)染復(fù)合物容許和細(xì)胞孵育的時(shí)間越短，說(shuō)明毒性越大。除了低毒性，還最好操作簡(jiǎn)便，越簡(jiǎn)單越好，比如有的轉(zhuǎn)染試劑要 求轉(zhuǎn)染前換無(wú)血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后又要有血清培養(yǎng)基，實(shí)際上，由于培養(yǎng)條件的頻繁變化，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞表達(dá)模式產(chǎn)生影響，對(duì)后續(xù)的mRNA和蛋 白分析也同樣產(chǎn)生影響，最終影響實(shí)驗(yàn)的可靠性。 EntransterTM-R siRNA專用轉(zhuǎn)染試劑，采用先進(jìn)的納米聚合物成分，細(xì)胞毒性非常低，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度可以低至20％，同時(shí)可以有血清有抗生素轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后無(wú)需換液，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性小，節(jié)約時(shí)間、精力和試劑，目前被許多著名實(shí)驗(yàn)室選用，是一款優(yōu)秀的siRNA轉(zhuǎn)染試劑。 |
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2樓2019-11-04 14:26:44
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