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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » 如何成功轉染siRNA
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如何成功轉染siRNA 已有1人參與
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1.設計合成有效的siRNA RNAi的核心需要 siRNA對相應mRNA進行有效的結合和作用。siRNA的設計合成首先很重要，最優(yōu)的設計可以用最小的工作濃度取得滿意的沉 默效果，減少副反應的發(fā)生。siRNA的設計可以通過檢索,優(yōu)先選用經過驗證的siRNA或設計多對siRNA。需要強調的是，需要同時設置陰性對照以排 除非特異沉默現象和陽性對照以確認整個實驗體系的有效性。 2.合成的siRNA注意純度和工作濃度 siRNA的合成需要注意的是一定要選用高純度的siRNA，siRNA的純度直接關系到轉染效率和沉默效率。siRNA的工作濃度和siRNA的設計、細胞種類、目標基因有關。建議一定進行相關的預實驗優(yōu)化各條件。 3.選擇合適的siRNA轉染試劑 選擇合適的 siRNA轉染試劑是的RNAi實驗成功另一個關鍵。由于細胞毒性對siRNA實 驗的影響非常大，可以直接影響實驗結論和結果，所以一定選擇低毒性的轉染試劑，看一個轉染試劑毒性是否低，有一個簡單的方法，看轉染的過程和要求，比如要 求的細胞密度越大，說明毒性越大，比如轉染復合物容許和細胞孵育的時間越短，說明毒性越大。除了低毒性，還最好操作簡便，越簡單越好，比如有的轉染試劑要 求轉染前換無血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基，轉染后又要有血清培養(yǎng)基，實際上，由于培養(yǎng)條件的頻繁變化，可能會對細胞表達模式產生影響，對后續(xù)的mRNA和蛋 白分析也同樣產生影響，最終影響實驗的可靠性。 EntransterTM-R siRNA專用轉染試劑，采用先進的納米聚合物成分，細胞毒性非常低，轉染時細胞密度可以低至20％，同時可以有血清有抗生素轉染，轉染后無需換液，轉染效率高，細胞毒性小，節(jié)約時間、精力和試劑，目前被許多著名實驗室選用，是一款優(yōu)秀的siRNA轉染試劑。 |
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2樓2019-11-04 14:26:44
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