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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 反向PCR
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15871472357金蟲 (小有名氣)
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[交流]
反向PCR
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我要從gDNA擴一個基因，怎么也擴不出來，然后文獻用的是反向PCR法，可是我看了，還是不懂怎么操作的，求各位了解反向pcr的大神給翻譯翻譯，謝謝，小弟散金求結果，因為馬上要開組會了 疑問：1、剛開始酶切gDNA用的是什么內切酶？ 2、為什么后面加入25ul的反應體系，加的模板是3ul的環(huán)話模板，為什么不是第二次酶切的模板？ 3、為什么gDNA要經(jīng)過濾膜過濾？ 360截圖20160908152938371.jpg |
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2樓2016-09-08 15:43:22
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3樓2016-09-08 20:55:53
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| 反向PCR一般用于從一段已知序列擴增兩側未知序列，參考文獻選擇SwaI是一個識別8個堿基的酶切位點，應該是在已知序列中不存在識別位點的酶，而且需要擴增的兩側序列比較長，才需要識別8的堿基的內切酶。酶切連接環(huán)化，就成了一個類似質粒的環(huán)狀DNA，可以從已知序列向兩外側擴增。擴增產物測序，找到酶切位點，比如參考文獻的是SwaI，以此為止模擬切開，得到已知序列兩外側到酶切位點之間的序列信息。 |
5樓2016-09-13 16:42:50
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7樓2016-09-21 23:55:48
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