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tolomua新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
做得想死,WB驗(yàn)證的結(jié)果RT-PCR卻重復(fù)不出來(lái) 已有1人參與
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是這樣的,實(shí)驗(yàn)組處理抬高了基因A的表達(dá),名為cell-A,對(duì)照組是cell-nc 做完這個(gè)處理后,經(jīng)WB驗(yàn)證有效,細(xì)胞形態(tài)和活力也有很大差異 之后我要做RT-PCR,設(shè)想的是,實(shí)驗(yàn)組抬高的基因A會(huì)影響基因BCDE……的表達(dá) 但是RT-PCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒(méi)什么差異,就連基因A也沒(méi)有差異 我曾經(jīng)想過(guò)是不是基因堿基發(fā)生同義突變導(dǎo)致引物沒(méi)有將它們P出來(lái),但那么多個(gè)基因同時(shí)突變的可能性太小了 提取RNA和RT的過(guò)程都很順利,所有引物同組在別的細(xì)胞上做過(guò)沒(méi)問(wèn)題,那么,還有可能是什么問(wèn)題呢? ![]() 我已經(jīng)做了三次了,每次都是從處理開(kāi)始做,每次都是這個(gè)狗樣子,實(shí)在是太灰心了,希望能夠得到大家的幫助 ![]() ![]() 我的金幣數(shù)少于5懸賞不了,所以只能發(fā)在交流版,抱歉 |
專(zhuān)家顧問(wèn) (著名寫(xiě)手)
| 你是通過(guò)什么途徑提高了A基因的表達(dá)?過(guò)表達(dá)還是說(shuō)藥物處理?推測(cè)你是藥物處理,通過(guò)加入某種東西刺激了A基因的表達(dá)。你說(shuō)WB很顯著?到底是多顯著?能否看下圖片?還有就是A基因的表達(dá)水平是怎樣的?能否告訴你做RT-qPCR起始的RNA量以及最終該基因的Ct值?最關(guān)鍵的一點(diǎn)就是你的WB結(jié)果有做生物學(xué)重復(fù)嗎?還是就做了一次很顯著呢?如果你做了幾次都是這樣的話(huà),即使RT-qPCR沒(méi)有顯著差異也是可以理解的,因?yàn)榈鞍琢康纳险{(diào)有兩種途徑,一是mRNA上調(diào)(可以通過(guò)RT-qPCR和WB檢測(cè)),二是降解減少(僅僅可以通過(guò)WB檢測(cè)),如果你的是第二種情況的話(huà),那么建議從蛋白質(zhì)降解途徑入手重新思考這個(gè)問(wèn)題。 |

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