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tolomua新蟲 (初入文壇)
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[交流]
做得想死，WB驗(yàn)證的結(jié)果RT-PCR卻重復(fù)不出來 已有1人參與
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是這樣的，實(shí)驗(yàn)組處理抬高了基因A的表達(dá)，名為cell-A，對(duì)照組是cell-nc 做完這個(gè)處理后，經(jīng)WB驗(yàn)證有效，細(xì)胞形態(tài)和活力也有很大差異 之后我要做RT-PCR，設(shè)想的是，實(shí)驗(yàn)組抬高的基因A會(huì)影響基因BCDE……的表達(dá) 但是RT-PCR的結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒什么差異，就連基因A也沒有差異 我曾經(jīng)想過是不是基因堿基發(fā)生同義突變導(dǎo)致引物沒有將它們P出來，但那么多個(gè)基因同時(shí)突變的可能性太小了 提取RNA和RT的過程都很順利，所有引物同組在別的細(xì)胞上做過沒問題，那么，還有可能是什么問題呢？  我已經(jīng)做了三次了，每次都是從處理開始做，每次都是這個(gè)狗樣子，實(shí)在是太灰心了，希望能夠得到大家的幫助 我的金幣數(shù)少于5懸賞不了，所以只能發(fā)在交流版，抱歉  |
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kuaile5420
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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| 你是通過什么途徑提高了A基因的表達(dá)？過表達(dá)還是說藥物處理？推測(cè)你是藥物處理，通過加入某種東西刺激了A基因的表達(dá)。你說WB很顯著？到底是多顯著？能否看下圖片？還有就是A基因的表達(dá)水平是怎樣的？能否告訴你做RT-qPCR起始的RNA量以及最終該基因的Ct值？最關(guān)鍵的一點(diǎn)就是你的WB結(jié)果有做生物學(xué)重復(fù)嗎？還是就做了一次很顯著呢？如果你做了幾次都是這樣的話，即使RT-qPCR沒有顯著差異也是可以理解的，因?yàn)榈鞍琢康纳险{(diào)有兩種途徑，一是mRNA上調(diào)（可以通過RT-qPCR和WB檢測(cè)），二是降解減少（僅僅可以通過WB檢測(cè)），如果你的是第二種情況的話，那么建議從蛋白質(zhì)降解途徑入手重新思考這個(gè)問題。 |
2樓2016-09-09 08:48:58
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