 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1283 | 回復(fù): 2 | |||
[交流]
細(xì)胞凋亡檢測實(shí)驗(yàn) 已有2人參與
|
|
實(shí)驗(yàn)方法原理 細(xì)胞凋亡或稱程序性細(xì)胞死亡（Programmed Cell Death ,PCD）是細(xì)胞的生命現(xiàn)象之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)及自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的清除等方面起著十分重要的作用。細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)的失控可導(dǎo)致臨床各種疾病的發(fā)生。如老年性癡呆與神經(jīng)細(xì)胞凋亡過度有關(guān)，自身免疫性疾病和腫瘤與細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。細(xì)胞凋亡有別于細(xì)胞壞死，它有一系列的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變，包括出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細(xì)胞，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine， PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在凋亡的細(xì)胞，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。因此將Annexin-Ⅴ進(jìn)行熒光素（如FITC、PE）或生物素（Biotin）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-Ⅴ作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 實(shí)驗(yàn)材料 Annexin V-FITC 試劑、試劑盒 標(biāo)記緩沖液PBS去離子水冰塊 儀器、耗材 移液器吸頭微量離心管可調(diào)速離心機(jī)載玻片蓋玻片流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡 實(shí)驗(yàn)步驟 1. 凋亡細(xì)胞的制備 小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重，10 h后解剖取胸腺，分離胸腺細(xì)胞。用PBS洗兩遍，調(diào)整待測細(xì)胞的濃度為2×106 /ml，備用。 2. 200 μl細(xì)胞懸液加入1 ml冷PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘，棄上清。 3. 重復(fù)步驟2兩次。 4. 將細(xì)胞重懸于200 μl 標(biāo)記緩沖液。 5. 加入10 μl Annexin V-FITC，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15 分鐘或4 ℃反應(yīng)30 分鐘。 6. 加入300 μl標(biāo)記緩沖液，立即上機(jī)（流式細(xì)胞儀）檢測。 注意事項(xiàng) 1. 整個操作過程動作要盡量輕柔，切勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4 ℃下操作。 2. 反應(yīng)完畢后要盡快檢測，因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應(yīng)一小時后熒光強(qiáng)度就開始衰變。 3. Annexin V-FITC是光敏物質(zhì)，在操作時要注意避光。 其他 一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 用熒光顯微鏡觀察，凋亡細(xì)胞細(xì)胞膜上可見黃綠色光環(huán)。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是調(diào)亡所特有的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。以FITC標(biāo)記的Annexin V, 可以同時結(jié)合使用PI（碘化丙啶）拒染法，用流式細(xì)胞儀分析可檢測凋亡細(xì)胞的百分率。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求調(diào)劑院校信息
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
260求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級已過
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
275求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
070300化學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
英格恩生物CCAA試劑盒產(chǎn)品介紹 CCAA試劑盒，Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit，是基于PI染色(Propidium staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的試劑盒。 PI (Propidium，碘化丙啶) 是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光，其強(qiáng)度與DNA含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被PI染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，根據(jù)DNA含量的分布情況，進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。 本試劑盒通常用于貼壁或懸浮細(xì)胞的周期與凋亡檢測。如果用于組織，則需要把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，再可以進(jìn)行檢測。 主要特點(diǎn) PI染液即開即用，無需再用緩沖液配制。 PI染液4℃存放，無需解凍，方便隨時取用。 不需要提前用RNA酶消化，超快，省時。 CCAA |
2樓2016-09-19 12:53:46
趙炎
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 30.1
- 帖子: 25
- 在線: 11.1小時
- 蟲號: 2536730
- 注冊: 2013-07-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
3樓2016-11-17 15:55:57
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 z妲妲 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 260求調(diào)劑 +3 | 朱芷琳 2026-03-20 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大，0703化學(xué)學(xué)碩304分，有大創(chuàng)項(xiàng)目，四級已過 +4 | 幸運(yùn)哩哩 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +4 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +3 | Sxy112 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+3
|
酥酥魚.. 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +5 | 87639 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩 348分求調(diào)劑 +3 | 冬辭. 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南大，0703化學(xué)，分?jǐn)?shù)336，求調(diào)劑 +3 | 收到VS 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +3 | 北道巷 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +6 | 想上岸的鯉魚 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境專碩，總分308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
申請回稿延期一個月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|