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[交流]
雙酶切分子克隆的分子過程 已有7人參與
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| 引物上含酶切序列，但是PCR產(chǎn)物不是有一部分只含有一條合成的引物嗎？這樣不是只有其中一條鏈含有一種酶切序列？怎么雙酶切法。。我的分子生物學(xué)方面學(xué)的很差不是很理解。印象中雙酶切是兩種酶同時切割目的片段和載體，按照PCR過程有一條模板鏈一條合成鏈，只有合成鏈才有引物才有酶切序列呀，雖然會有一部分合成鏈會成為模板，但還是有很多pcr產(chǎn)物是一條模板鏈一條合成鏈的吧 |
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010308Jing
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4樓2016-09-17 12:52:08
010308Jing
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只有一個酶切位點(diǎn)的產(chǎn)物你做酶連后是轉(zhuǎn)化不出克隆的，不用擔(dān)心這個問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-09-18 05:31:44
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你說的這種情況只是第一個循環(huán)的產(chǎn)物 后面循環(huán)就是帶有雙酶切位點(diǎn)的dna了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
13樓2016-09-22 16:20:48
juzhixianwei
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因?yàn)槠鹗嫉哪０辶亢艿�，所以PCR產(chǎn)物主要還是合成鏈，合成鏈?zhǔn)请p鏈DNA,兩頭分別是兩段引物，所以含有引物上的酶切序列 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-09-16 16:51:47
3樓2016-09-16 16:52:10
luckydog52
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5樓2016-09-17 21:24:44
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我意思是，根據(jù)半保留復(fù)制， pcr完成后，產(chǎn)物不是會有一部分DNA，其雙鏈中有一條我們加的模板（上面沒有引物），另一條是帶有我們合成的引物的合成鏈嗎？這樣這部分產(chǎn)物不就只有一個酶切位點(diǎn)了嗎 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-09-17 22:12:49
didongwei
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8樓2016-09-18 08:31:43
9樓2016-09-21 05:16:34
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謝謝，不過我的問題在於雙酶切，載體上有兩個切口，那我的目的基因也應(yīng)該是兩個一樣的切口，然後正向引物和反向引物各有一個酶切位點(diǎn)。那麼理想的情況是正向和反向引物所在的單鏈組成雙鏈，可是我們加入的模板是沒有引物的呀，也我意思就是pcr合成的DNA雙鏈中，其中一種為正向引物結(jié)合在5'→3'模板鏈，另一種是反向引物結(jié)合在3'→5'模板鏈合成的，這樣新合成的DNA就只含有正向引物或只含有反向引物，也就是只含有一個酶切位點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-09-22 14:44:29
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