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g0945111木蟲 (小有名氣)
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[求助]
咨詢怎么研究一個已知的基因看其是否轉(zhuǎn)錄、翻譯 已有2人參與
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一個已知的基因，怎么追蹤他是否轉(zhuǎn)錄了、然后翻譯了，想評價這個基因的危害。 比如一個樣品中檢測到微生物有很多某個基因如抗性基因，似乎并不能說明其對人類是否有益或者有害，但如果我可以證明這個基因轉(zhuǎn)錄、翻譯了，那我是可以比較明確的評價的危害的。 怎么做到呢？是需要我解析下一些抗藥的蛋白或者酶的序列、反轉(zhuǎn)錄找到序列，然后找對應的DNA序列嗎？但尋找到抗藥的蛋白本身就是個比較復雜的過程，這個方法似乎不可取。到底該怎么做?求思路。。。。非常感謝@biostar2009 |
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didongwei
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【答案】應助回帖
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查看是否轉(zhuǎn)錄，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后做定量或半定量就行。至于是否翻譯成蛋白質(zhì)，可以提取蛋白，然后打質(zhì)譜，或者做帶標記的融合蛋白的轉(zhuǎn)基因植株，然后查看標記蛋白是否表達來判斷。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2016-09-20 21:18:07
g0945111
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前邊的這一步我基本是懂得，就是說我把RNA反轉(zhuǎn)錄之后得到的cDNA序列用轉(zhuǎn)錄之前的那個基因的引物做定量或者半定量就可以確定它是不是轉(zhuǎn)錄了。 后邊這一步還是不太明白，我想看我轉(zhuǎn)錄的這一步RNA是否由他指導合成(翻譯）蛋白質(zhì)，打質(zhì)譜出來的是分析這種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)吧，關鍵問題是我現(xiàn)在不知道他轉(zhuǎn)錄之后是否合成了蛋白質(zhì)，我就不知道有沒有這種蛋白質(zhì)，該怎么解析這個RNA是否翻譯成了蛋白呢？您的意思是所有的蛋白都解析結(jié)構(gòu)，然后找個庫比對，然后尋找到目標蛋白嗎？后邊您提到的這個帶標記的融合蛋白就更不太清楚了，這是怎么樣的一個操作，從哪一步開始標記。是把某個帶標記的蛋白插入到我要研究的這個基因里邊去，如果這個蛋白表達了就證明我的基因也表達了嗎? 請您賜教，非常感謝您的回答。 |
3樓2016-09-21 10:05:43
didongwei
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提取蛋白后，跑膠，在相應大小的位置找是否有蛋白，然后打質(zhì)譜，看是否與RNA翻譯出來一一對應。另外一個是構(gòu)建載體，將你研究基因的啟動子，基因和標記蛋白連在一起做轉(zhuǎn)基因，在轉(zhuǎn)基因后代中看標記基因是否表達就可以啦 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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g09451114樓2016-09-21 19:01:38
g0945111
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6樓2016-09-24 08:27:31
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