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g0945111木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
咨詢?cè)趺囱芯恳粋�(gè)已知的基因看其是否轉(zhuǎn)錄、翻譯 已有2人參與
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一個(gè)已知的基因，怎么追蹤他是否轉(zhuǎn)錄了、然后翻譯了，想評(píng)價(jià)這個(gè)基因的危害。 比如一個(gè)樣品中檢測(cè)到微生物有很多某個(gè)基因如抗性基因，似乎并不能說(shuō)明其對(duì)人類(lèi)是否有益或者有害，但如果我可以證明這個(gè)基因轉(zhuǎn)錄、翻譯了，那我是可以比較明確的評(píng)價(jià)的危害的。 怎么做到呢？是需要我解析下一些抗藥的蛋白或者酶的序列、反轉(zhuǎn)錄找到序列，然后找對(duì)應(yīng)的DNA序列嗎？但尋找到抗藥的蛋白本身就是個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程，這個(gè)方法似乎不可取。到底該怎么做?求思路。。。。非常感謝@biostar2009 |
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didongwei
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kuaile5420: 金幣+1, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流 2016-09-21 19:29:56
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查看是否轉(zhuǎn)錄，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后做定量或半定量就行。至于是否翻譯成蛋白質(zhì)，可以提取蛋白，然后打質(zhì)譜，或者做帶標(biāo)記的融合蛋白的轉(zhuǎn)基因植株，然后查看標(biāo)記蛋白是否表達(dá)來(lái)判斷。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2016-09-20 21:18:07
g0945111
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前邊的這一步我基本是懂得，就是說(shuō)我把RNA反轉(zhuǎn)錄之后得到的cDNA序列用轉(zhuǎn)錄之前的那個(gè)基因的引物做定量或者半定量就可以確定它是不是轉(zhuǎn)錄了。 后邊這一步還是不太明白，我想看我轉(zhuǎn)錄的這一步RNA是否由他指導(dǎo)合成(翻譯）蛋白質(zhì)，打質(zhì)譜出來(lái)的是分析這種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)吧，關(guān)鍵問(wèn)題是我現(xiàn)在不知道他轉(zhuǎn)錄之后是否合成了蛋白質(zhì)，我就不知道有沒(méi)有這種蛋白質(zhì)，該怎么解析這個(gè)RNA是否翻譯成了蛋白呢？您的意思是所有的蛋白都解析結(jié)構(gòu)，然后找個(gè)庫(kù)比對(duì)，然后尋找到目標(biāo)蛋白嗎？后邊您提到的這個(gè)帶標(biāo)記的融合蛋白就更不太清楚了，這是怎么樣的一個(gè)操作，從哪一步開(kāi)始標(biāo)記。是把某個(gè)帶標(biāo)記的蛋白插入到我要研究的這個(gè)基因里邊去，如果這個(gè)蛋白表達(dá)了就證明我的基因也表達(dá)了嗎? 請(qǐng)您賜教，非常感謝您的回答。 |
3樓2016-09-21 10:05:43
didongwei
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提取蛋白后，跑膠，在相應(yīng)大小的位置找是否有蛋白，然后打質(zhì)譜，看是否與RNA翻譯出來(lái)一一對(duì)應(yīng)。另外一個(gè)是構(gòu)建載體，將你研究基因的啟動(dòng)子，基因和標(biāo)記蛋白連在一起做轉(zhuǎn)基因，在轉(zhuǎn)基因后代中看標(biāo)記基因是否表達(dá)就可以啦 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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g09451114樓2016-09-21 19:01:38
g0945111
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