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殷筱婕新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
大神求助，酶切，瓊脂糖凝膠電泳，你所沒(méi)見(jiàn)過(guò)的奇異情況，我無(wú)法解釋
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如圖，這兩個(gè)圖的marker和dna樣品都是同樣的，一個(gè)是今天做的120v的電壓（picture 1），還一個(gè)是昨天做的70v的電壓（picture 2），可是卻發(fā)現(xiàn)，按理說(shuō)同樣樣品和marker，條帶應(yīng)該一致也與marker對(duì)應(yīng)的位置一致，可是現(xiàn)在卻顯現(xiàn)的位置不一樣了，請(qǐng)問(wèn)這是為什么呢？有哪些可能造成的原因呢？謝謝 另外，我這個(gè)是酶切的鑒定（adeasy system， 最后一步用pac I 酶切線(xiàn)性化，然后轉(zhuǎn)到293a細(xì)胞內(nèi)。），泳道1,3是對(duì)照，沒(méi)有酶切，2,4是pac I 酶切的，這樣的結(jié)果算是酶切成功嗎？ 注釋?zhuān)篢BE是0.5%， 膠的濃度是0.7% agarose。 Picture2.png Picture1.png |
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ken19860823
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2樓2016-09-27 10:39:16
殷筱婕
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3樓2016-09-27 23:22:55
ken19860823
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你測(cè)序通過(guò)沒(méi)，如果你測(cè)序通過(guò)了，換一個(gè)大點(diǎn)的marker，只要你的那條大條帶是36kb，基本沒(méi)問(wèn)題，如果不保險(xiǎn)找一個(gè)單酶切位點(diǎn)做對(duì)照。電壓控制在110V看看，時(shí)間跑長(zhǎng)一下。最好能找到質(zhì)粒marker.做酶切驗(yàn)證或者線(xiàn)性化沒(méi)對(duì)照很頭疼的，你的3KB小條帶很可能由于你的酶切的量跟染料的關(guān)系不顯示的，不過(guò)線(xiàn)性化的量一般是5ug左右，理論上是必須看得到的。 |
4樓2016-09-28 09:12:31
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