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求助,酶切之后,非但是沒有產(chǎn)物,而且連原本的質(zhì)粒也沒跑出來 已有1人參與
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| 酶切之后,非但是沒有產(chǎn)物,而且連原本的質(zhì)粒也沒跑出來。我用得世PET32a質(zhì)粒做雙酶切,體系為10*buffer tango 10微升 BamhI 2微升 X—hol 2微升 質(zhì)粒 36微升。之前提了4管32a質(zhì)粒,瓊脂糖凝膠電泳跑膠都有非常明顯的條帶,可是經(jīng)過37度6小時的雙酶切之后,再去跑膠發(fā)現(xiàn)32a質(zhì)粒也不見了。但是marker還是跑的很清晰,另外,我還同時做了PigC基因的雙酶切也是37度切了6個小時,但是卻跑出了比較暗的條帶,這是和32a雙酶切后質(zhì)粒一起跑的,好糾結(jié),做了兩個月了,已經(jīng)出現(xiàn)好對此32a質(zhì)粒酶切之后就不見了,有時候經(jīng)過純化試劑盒純化之后也會沒有,郁悶了.....求各位大神指點,小子本科生,實在是經(jīng)驗少。。。求指點,金幣也只有這么點,各位別嫌少啊 |
木蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
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3樓: Originally posted by 無敵小莫 at 2014-02-27 22:51:27 是這樣的,學(xué)校儀器不怎么好使,當(dāng)時U盤插進(jìn)去也沒反應(yīng),我精確描述給你,PigC在將近3000bp處有暗條帶,這個看起來還是很明顯的,因為周圍都很暗。而32a質(zhì)粒則全部都是黑的。但是在膠的最盡頭卻是都有相當(dāng)一大片的 ... 膠的盡頭指的是梳孔處還是跑的底部?要是底部的話,說明全部切碎了。要不就是您的質(zhì)粒里存在大量的BamH I的位點,要不就是酶切反應(yīng)中有其它污染。如果是梳孔處,則說明完全沒切開,可能是質(zhì)粒提取的質(zhì)量不高,影響了酶切。 |
木蟲 (正式寫手)
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5樓: Originally posted by 無敵小莫 at 2014-02-27 23:06:54 膠不是有打樣孔嗎,我說的膠的盡頭指的不是打樣孔那一邊,這個東西已經(jīng)搞了兩個多月了,寒假之前也在搞,我的組員都不樂意做了,我也是沒辦法。。。... 告訴老板,買新酶,這個用不了多少錢。還有就是你提質(zhì)粒時候嚴(yán)格按照試劑盒來,洗干凈點,最后一步一定不要有乙醇?xì)埩,而且不能吹得太干。加油? |
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