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個(gè)人感覺樓主可以從以下幾個(gè)方面來判斷一下：第一是看溴酚藍(lán)是否跑走了，如果跑走了，應(yīng)該電泳緩沖液就沒有問題；第二是加大一下上樣量，有時(shí)候酶切過后的條帶比未酶切的條帶要弱（我也碰到這樣的問題，不清楚為什么）；第三是如樓上所說，點(diǎn)上未經(jīng)酶切的質(zhì)粒和片段作為對(duì)照。如果還是跑不出來，建議樓主用自己的引物以酶切產(chǎn)物為模板做下PCR，看是否是因?yàn)槠谓到獾膯栴}。希望能幫到你！

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努力！

6樓2012-09-19 16:11:48

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2樓: Originally posted by 酶切專家 at 2012-09-18 21:57:10
你電泳時(shí)有沒有酶切的質(zhì)粒或DNA對(duì)照嗎？不會(huì)是沒加EB吧？

同一塊膠上另一半跑的pcr產(chǎn)物都有帶，就只是酶切的沒有條帶

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7樓2012-09-20 15:55:38

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3樓: Originally posted by 尚慕寒 at 2012-09-18 23:13:02
沒帶MARKER？完全空白估計(jì)是忘記加EB了吧

marker有的，EB加了

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8樓2012-09-20 15:56:10

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4樓: Originally posted by 無疆@行者 at 2012-09-18 23:48:57
你用MARKER，酶切前后產(chǎn)物，一起跑一下。7個(gè)小時(shí)感覺時(shí)間太長了，酶的活性很高，3個(gè)小時(shí)感覺就可以了

我第二天切了兩個(gè)小時(shí)，依然什么也沒有，主要是我那是個(gè)混合酶切位點(diǎn)，時(shí)間短了，怕是切不開

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9樓2012-09-20 15:57:22

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5樓: Originally posted by bclz at 2012-09-19 10:39:26
質(zhì)粒和DNA的質(zhì)量怎樣？如果沒問題的話，那就是膠或者跑電泳的問題，點(diǎn)樣漏了或者是緩沖液用的時(shí)間太久了，或者就像樓上所說，沒加EB或者EB失效了。另外，酶切7小時(shí)是有點(diǎn)長，我們一般三小時(shí)就OK了。

質(zhì)粒和DNA的片段都取2ul上過樣了的，有條帶，DNA片段的雖然較淺，看還是能看清的。膠上另一半跑的其它東西有條帶，一連5個(gè)孔都漏了的可能性也不大吧畢竟同一塊膠上另一半的沒有漏。

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10樓2012-09-20 16:00:45

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