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fannyzehong銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙酶切看不到小片段，為什么？
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質(zhì)粒雙酶切看不到小片段，是怎么回事？是雙酶切失敗了嗎？請各位大俠幫忙分析分析，謝謝! 泳道1：質(zhì)粒；2：BamHI單酶切；3：NcoI單酶切；4：BamHI,NcoI雙酶切 |
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世外清風(fēng)
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare: 金幣+5, BioEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 很重要的原因 2012-04-28 11:49:30
fannyzehong: 金幣+1 2012-04-28 17:13:18
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fannyzehong: 金幣+1 2012-04-28 17:13:18
| 你酶切量太少了，可以看出你切出的小片段很小吧，他們是等摩爾比的，你的質(zhì)粒好像有十幾Kb了，你切出的可能只有100bp,這樣一比100：1，按亮度來看，稀釋100倍看不見很正常，建議擴(kuò)大質(zhì)粒的量，按比例算一一算，保證小片段至少也得幾百ng吧，除去回收的損失，才有的用。祝好運(yùn)！ |
7樓2012-04-28 10:15:41
cxfans
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2樓2012-04-27 21:40:21
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 我自己在實(shí)驗(yàn)中也遇到過這種情況，雙酶切后只能看到載體片段而看不見目標(biāo)基因片段，據(jù)師兄說是因?yàn)槿绻d體的分子量是目標(biāo)基因分子量的幾百倍，同樣拷貝數(shù)的情況下載體與基因的亮度也呈相應(yīng)的比例，也就是說載體會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)亮于基因，不知道你具體試驗(yàn)中是什么情況，希望這個(gè)回答對你有所幫助 |
3樓2012-04-27 22:33:07
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4樓2012-04-27 23:39:21
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5樓2012-04-27 23:53:11
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6樓2012-04-28 09:22:53
8樓2012-04-28 10:35:10
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9樓2012-04-28 10:56:21
10樓2012-04-28 14:07:26
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