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貓咪胖胖新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】為什么我的PCR產(chǎn)物總是連接不上T載體 已有21人參與
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我PCR回收得到的片段，與T載體連接后轉(zhuǎn)化搖菌提質(zhì)粒后可以P出目的條帶，但測(cè)序總顯示是空載體，不知道怎么回事。 PMD-18T和T1-simple都試過(guò)。 |
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susizheng
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dhd997(金幣+5): 謝謝交流 2011-02-14 10:25:15
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dhd997(金幣+5): 謝謝交流 2011-02-14 10:25:15
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酶切一下，如果切不對(duì)，說(shuō)明你前面酶切的酶有核酸外切酶活性，連接之前的那次酶切就少了幾個(gè)堿基了，這可能是原因之一，用純一點(diǎn)的酶。 另外，菌P能出結(jié)果不一定就是對(duì)的，PCR這東西很難說(shuō)的，有一點(diǎn)點(diǎn)都能擴(kuò)增出來(lái)，說(shuō)明不了啥太多的問(wèn)題。 還有可能是連接的時(shí)候手法操作有問(wèn)題，換個(gè)人連接試試看，生物實(shí)驗(yàn)這東西有時(shí)候是挺邪門(mén)的，或者回去睡上三天大覺(jué)，回來(lái)就都出來(lái)了。 |
4樓2011-02-14 09:59:41
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