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[交流]
【求助/交流】為什么我的PCR產(chǎn)物總是連接不上T載體 已有21人參與
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我PCR回收得到的片段，與T載體連接后轉(zhuǎn)化搖菌提質(zhì)粒后可以P出目的條帶，但測序總顯示是空載體，不知道怎么回事。 PMD-18T和T1-simple都試過。 |
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gongeleven
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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5樓2011-02-14 14:01:08
susizheng
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3樓2011-02-14 08:45:03
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): 謝謝交流 2011-02-14 10:25:15
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+5): 謝謝交流 2011-02-14 10:25:15
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酶切一下，如果切不對，說明你前面酶切的酶有核酸外切酶活性，連接之前的那次酶切就少了幾個堿基了，這可能是原因之一，用純一點(diǎn)的酶。 另外，菌P能出結(jié)果不一定就是對的，PCR這東西很難說的，有一點(diǎn)點(diǎn)都能擴(kuò)增出來，說明不了啥太多的問題。 還有可能是連接的時候手法操作有問題，換個人連接試試看，生物實(shí)驗(yàn)這東西有時候是挺邪門的，或者回去睡上三天大覺，回來就都出來了。 |
4樓2011-02-14 09:59:41
6樓2011-02-16 15:50:14
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