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qingsong35銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問題 已有3人參與
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| 請問有人用過SacII和PmlI對pPICZA進行過雙酶切嗎？我用的是NEB的酶，用SacII和PmlI雙酶切質(zhì)粒pPICZA和PCR產(chǎn)物（1Kb），酶切緩沖液和質(zhì)粒的量都嚴(yán)格按照說明書進行，并切了12h。然后進行連接轉(zhuǎn)化，提取轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒發(fā)現(xiàn)這些轉(zhuǎn)化子都是假陽性，提取出的質(zhì)粒的大小與載體pPICZA相當(dāng)，這應(yīng)該是載體自連導(dǎo)致的。請問是不是用SacII和PmlI很難將pPICZA酶切干凈？謝謝 |
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hyw1989960
木蟲 (正式寫手)
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2樓2010-05-19 14:37:28
3樓2010-05-19 16:27:17
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呵呵，那怎么可能不回收就去連接呢。載體和PCR產(chǎn)物酶切12h后，利用QIAGENE的試劑盒進行純化，然后才去連接的。切了那么久還是自連，郁悶啊 4樓2010-05-19 21:50:50
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請教一下，那我的PCR產(chǎn)物是不是也應(yīng)該要分步去切呢？5樓2010-05-19 21:53:24
6樓2010-05-20 10:16:06
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