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基因敲除后的互補實驗
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實驗室?guī)熜忠呀?jīng)利用同源重組的方式通過PEG介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法成功將一個基因敲掉了，并且通過了PCR及southern驗證是正確，現(xiàn)在我需要接著做互補，我看文獻正在構(gòu)建了互補載體，但我對后面的實驗有所困惑，我要是互補載體構(gòu)建好了，然后我用敲掉的基因的轉(zhuǎn)化子做原生質(zhì)體，之后我是直接把互補載體導入原生質(zhì)體嗎？還是要將互補載體酶切或者什么的？原理是什么呢？希望懂得的大神幫我解答一下，不勝感激 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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longevens
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 病原真菌學
您好，請問樓樓，我最近也在做原生質(zhì)體，我的原因是在原生質(zhì)體離心這一方面，8000轉(zhuǎn)離心3分鐘，直接傾倒，然后鏡檢酶解上清液，發(fā)現(xiàn)上清液還是有很多的原生質(zhì)體。然后再次用0.7NaCl清洗離心，傾倒上清液，然后再鏡檢就只有一點點原生質(zhì)體了 根本不夠做轉(zhuǎn)化，樓樓請問你是怎么處理上清液的呢？我現(xiàn)在都不敢倒了。還有你每次是做多少體系的呢？我是做的10ml得酶解體系；還有為什么我在用STC懸浮的時候溶液會變成乳白色呢（STC溶液是澄清的，配方跟大眾一樣）？離心完了就成了白色粘稠沉淀，鏡檢完全看不到原生質(zhì)體了，感覺被裹住了。非常希望您的幫助。 |
2樓2017-08-10 17:06:28
rabbit12510
鐵蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 植物病理學
3樓2018-11-25 09:47:24
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