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基因敲除后的互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)
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實(shí)驗(yàn)室?guī)熜忠呀?jīng)利用同源重組的方式通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法成功將一個(gè)基因敲掉了,并且通過了PCR及southern驗(yàn)證是正確,現(xiàn)在我需要接著做互補(bǔ),我看文獻(xiàn)正在構(gòu)建了互補(bǔ)載體,但我對(duì)后面的實(shí)驗(yàn)有所困惑,我要是互補(bǔ)載體構(gòu)建好了,然后我用敲掉的基因的轉(zhuǎn)化子做原生質(zhì)體,之后我是直接把互補(bǔ)載體導(dǎo)入原生質(zhì)體嗎?還是要將互補(bǔ)載體酶切或者什么的?原理是什么呢?希望懂得的大神幫我解答一下,不勝感激 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
鐵蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
您好,請(qǐng)問樓樓,我最近也在做原生質(zhì)體,我的原因是在原生質(zhì)體離心這一方面,8000轉(zhuǎn)離心3分鐘,直接傾倒,然后鏡檢酶解上清液,發(fā)現(xiàn)上清液還是有很多的原生質(zhì)體。然后再次用0.7NaCl清洗離心,傾倒上清液,然后再鏡檢就只有一點(diǎn)點(diǎn)原生質(zhì)體了 根本不夠做轉(zhuǎn)化,樓樓請(qǐng)問你是怎么處理上清液的呢?我現(xiàn)在都不敢倒了。還有你每次是做多少體系的呢?我是做的10ml得酶解體系;還有為什么我在用STC懸浮的時(shí)候溶液會(huì)變成乳白色呢(STC溶液是澄清的,配方跟大眾一樣)?離心完了就成了白色粘稠沉淀,鏡檢完全看不到原生質(zhì)體了,感覺被裹住了。非常希望您的幫助。 |

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