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MIDNA鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)雙酶切問(wèn)題，求助�。�！ 已有5人參與
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| 我做了好幾次酶切，但總沒(méi)有切下來(lái)目的條帶！是怎么回事��？希望各位師兄師姐幫助解決！�。� |
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小冀-
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【答案】應(yīng)助回帖
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如果雙酶切切不開(kāi)的話(huà)，可以分步酶切，如果還不行的話(huà)，考慮是不是酶不行，如果換了的話(huà)還是不行，就考慮是質(zhì)粒的問(wèn)題，可以向樓上說(shuō)的那樣測(cè)序 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
8樓2016-10-08 23:11:37
010308Jing
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【答案】應(yīng)助回帖
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xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-10-10 21:50:44
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有可能是buffer的問(wèn)題，也有可能是模板本身的問(wèn)題，可以把模板測(cè)個(gè)序，看看那兩個(gè)酶切位點(diǎn)是不是在 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2016-10-08 16:37:06
MIDNA
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2016-10-08 16:44:26
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xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-10-10 21:51:15
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你測(cè)過(guò)了嗎？我們現(xiàn)在也遇到了這種情況，在addgene上買(mǎi)的，給我序列是有那兩個(gè)酶切位點(diǎn)，但是切不動(dòng)，現(xiàn)在只能去測(cè)序驗(yàn)證下 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
4樓2016-10-08 16:48:22
MIDNA
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5樓2016-10-08 17:04:59
原海亮
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-10-08 22:16:55
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你這個(gè)質(zhì)粒是篩選的克隆么？如果是就兩個(gè)原因吧，第一，克隆載體為陰性的，這個(gè)你可以用特異性引物或者通用引物來(lái)做個(gè)PCR驗(yàn)證，確定一下載體上面有沒(méi)有目的條帶，如果根本沒(méi)有目的片段插入，你雙酶切也是沒(méi)有目的條帶；第二，你的載體是有目的條帶的，那么原因一方面可能是有些酶容易甲基化等一些修飾導(dǎo)致酶切位點(diǎn)失效，這個(gè)可以看看酶的說(shuō)明書(shū)，如果是這樣，可以換為載體上的其他酶，來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。另一個(gè)原因或許就是你使用的酶有問(wèn)題了，闊以嘗試更換新酶試一下，祝好！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
6樓2016-10-08 18:22:11
MIDNA
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7樓2016-10-08 21:58:08
tangbowen
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9樓2016-10-10 00:03:47
yvonne9044
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-10 21:53:02
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原因可能很多，你盡量多做對(duì)照，不知道你質(zhì)粒檢測(cè)了沒(méi)有，測(cè)序要是沒(méi)有問(wèn)題就要考慮內(nèi)切酶是不是有問(wèn)題，有的酶最適溫度不同，或者不能共用一個(gè)buffer,還有就是切下來(lái)的片段太少電泳看不見(jiàn)？那就還是酶效率的問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
10樓2016-10-10 00:20:25
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