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[求助]
關(guān)于rt-qpcr的數(shù)據(jù)處理求助 已有1人參與
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被老師分配的是腫瘤組織里提取的cDNA和正常人組織里提取的cDNA表達(dá)量差異 用的是SYBR Ⅱ，每次3個復(fù)孔，每個樣本三次重復(fù)�，F(xiàn)有12個正常人樣本，11個腫瘤組織樣本。 使用2-ΔΔCt的方法進(jìn)行分析。 想問的問題是：1.ΔΔCt=ΔCt（患者）-ΔCt（正常人對照）中，ΔCt（正常人對照）是什么？是把所有正常人樣本的ΔCt（正常人對照）分別計(jì)算，再進(jìn)行平均么？ 2.不同正常人樣本的ΔCt的差異比較大，是因?yàn)閭�體差異么？對于差異特別大的，應(yīng)不應(yīng)該進(jìn)行取舍？如果需要，差異大到什么程度需要取舍呢？ 3.有兩個腫瘤組織樣本的所有基因，不論查到的資料里說是上調(diào)還是下調(diào)，用同樣方法計(jì)算出的2-ΔΔCt值遠(yuǎn)小于1，而其他樣本的結(jié)果基本都符合查到的資料。但奇怪的是它們的曲線看起來都很正常。這個應(yīng)該怎么解釋呢？ 英文閱讀能力不太強(qiáng)又被老師趕著逼著學(xué)會數(shù)據(jù)處理。。感覺好崩潰=皿=萬能的蟲友們求幫忙。平時只看帖不怎么簽到回帖的只有這么多金幣，求不嫌棄 |
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3樓2016-10-14 00:21:31
bio轉(zhuǎn)錄組
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 48 (小學(xué)生)
- 金幣: 1071.4
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- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kuaile5420: 金幣+3, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-14 00:01:18
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kuaile5420: 金幣+3, 歡迎發(fā)帖交流 2016-10-14 00:01:18
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1、正常人的對照就是所謂的內(nèi)參，做rtPCR必須有內(nèi)參，因?yàn)檫@個是相對定量。一般也是3個重復(fù)之間的平均。 2、一般選用內(nèi)參的需要很穩(wěn)定的基因，差別太多，參考價值不大，有可能是你點(diǎn)樣的問題，或者其他 3、這個差距很正常，1000個人做就會有1000中結(jié)果。 最后提示 多看看碩博畢業(yè)論文，比文章有用。數(shù)據(jù)處理必須學(xué)，這個很重要也很實(shí)用 |
2樓2016-10-13 21:30:53
4樓2018-01-11 06:42:08
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