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Flieish新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于rt-qpcr的數(shù)據(jù)處理求助 已有1人參與
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被老師分配的是腫瘤組織里提取的cDNA和正常人組織里提取的cDNA表達(dá)量差異 用的是SYBR Ⅱ，每次3個(gè)復(fù)孔，每個(gè)樣本三次重復(fù)�，F(xiàn)有12個(gè)正常人樣本，11個(gè)腫瘤組織樣本。 使用2-ΔΔCt的方法進(jìn)行分析。 想問(wèn)的問(wèn)題是：1.ΔΔCt=ΔCt（患者）-ΔCt（正常人對(duì)照）中，ΔCt（正常人對(duì)照）是什么？是把所有正常人樣本的ΔCt（正常人對(duì)照）分別計(jì)算，再進(jìn)行平均么？ 2.不同正常人樣本的ΔCt的差異比較大，是因?yàn)閭�(gè)體差異么？對(duì)于差異特別大的，應(yīng)不應(yīng)該進(jìn)行取舍？如果需要，差異大到什么程度需要取舍呢？ 3.有兩個(gè)腫瘤組織樣本的所有基因，不論查到的資料里說(shuō)是上調(diào)還是下調(diào)，用同樣方法計(jì)算出的2-ΔΔCt值遠(yuǎn)小于1，而其他樣本的結(jié)果基本都符合查到的資料。但奇怪的是它們的曲線看起來(lái)都很正常。這個(gè)應(yīng)該怎么解釋呢？ 英文閱讀能力不太強(qiáng)又被老師趕著逼著學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)處理。。感覺(jué)好崩潰=皿=萬(wàn)能的蟲(chóng)友們求幫忙。平時(shí)只看帖不怎么簽到回帖的只有這么多金幣，求不嫌棄 |
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4樓2018-01-11 06:42:08
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、正常人的對(duì)照就是所謂的內(nèi)參，做rtPCR必須有內(nèi)參，因?yàn)檫@個(gè)是相對(duì)定量。一般也是3個(gè)重復(fù)之間的平均。 2、一般選用內(nèi)參的需要很穩(wěn)定的基因，差別太多，參考價(jià)值不大，有可能是你點(diǎn)樣的問(wèn)題，或者其他 3、這個(gè)差距很正常，1000個(gè)人做就會(huì)有1000中結(jié)果。 最后提示 多看看碩博畢業(yè)論文，比文章有用。數(shù)據(jù)處理必須學(xué)，這個(gè)很重要也很實(shí)用 |
2樓2016-10-13 21:30:53
Flieish
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3樓2016-10-14 00:21:31
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