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定磷法檢測磷脂濃度?
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有無人做過定磷法檢測磷脂濃度的?問題請教,本人新手 步驟: 鉬酸銨溶液:取220mg溶于75ml純水中,緩慢加入200ul濃硫酸,定容至100ml。 Fiske-Subbarow溶液:取亞硫酸氫鈉15g、亞硫酸鈉0.5g,溶于100ml純水中,加入1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.25g,在通風櫥中40℃水浴避光電磁攪拌1.0-2.0h。室溫下,避光靜置過夜,濾除不溶物,儲存于棕色試劑瓶中備用。 磷標準液(1mmol/L):精確秤取無水磷酸氫二鈉14.2mg,溶于純水,定容至100ml。 樣品制備:待測樣本或標準品100ul,加入0.5ml 5M H2SO4 消化至無機磷酸鹽 180℃孵育2-3小時。100ul 30% H2O2 烤箱1.5h孵育。 加入4.6ml 0.22%鉬酸銨和0.2ml的Fiske-Subbarow溶液 沸水浴中7min,冰水浴中快速冷卻,830nm吸光度測定吸光度。 繪制標準曲線,測定待測樣本濃度 這個過程對不?步驟中有什么需要注意的部分?尤其是180℃加入步驟,實驗室沒有電爐或者消化爐等,油浴可以嗎?還有硫酸加熱中,看在通風廚中進行,消化步驟中有危險不? 做過的人給指點下 |
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