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生物素-親和素放大系統(tǒng)放大抗體信號(hào)的問(wèn)題 已有2人參與
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| 各位大神們,哪位可以解答一下這個(gè)問(wèn)題:雙抗體夾心法測(cè)抗原,生物素化抗體A+無(wú)修飾抗體B能放大;但是若將抗體B生物素化,不修飾A抗體,(就是順序顛倒一下)就不會(huì)放大信號(hào)。誰(shuí)能解釋一下,萬(wàn)分感謝! |
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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1.抗體B生物素化后可能會(huì)影響其結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致其和抗原的結(jié)合能力減弱。 2.還有種可能是抗體A以被動(dòng)吸附的方式包板后,其構(gòu)型發(fā)生了一定改變影響了其結(jié)合位點(diǎn)。 關(guān)于這兩點(diǎn)的確認(rèn)建議: 1.通過(guò)抗Fc酶聯(lián)抗體去評(píng)估一下生物素化前后,抗體A和抗原其結(jié)合能力是否發(fā)生改變(抗原少量包被,測(cè)試抗體B生物素化前后劑量曲線,通過(guò)EC50比較) 2.抗Fc抗體包被酶標(biāo)板條,加入抗體A和直接包被抗體A,然后加抗原,加抗體B,酶聯(lián)抗體顯色,比較一下信號(hào)大小 ELISA的信號(hào)大小受很多因素影響,一般會(huì)有一定波動(dòng),一般可以通過(guò)調(diào)整酶聯(lián)抗體的濃度把信號(hào)維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的值 |
銅蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (初入文壇)
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樓主做得事ELISA還是磁微粒。苛硪粋(gè)抗體不修飾是什么意思,另一個(gè)抗體不應(yīng)該用酶標(biāo)記嗎? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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