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生物素-親和素放大系統(tǒng)放大抗體信號的問題 已有2人參與
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| 各位大神們，哪位可以解答一下這個問題：雙抗體夾心法測抗原，生物素化抗體A+無修飾抗體B能放大；但是若將抗體B生物素化，不修飾A抗體，（就是順序顛倒一下）就不會放大信號。誰能解釋一下，萬分感謝！ |
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2樓2016-11-16 10:10:16
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
meijiafei: 金幣+10, ★有幫助 2016-11-17 12:19:45
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meijiafei: 金幣+10, ★有幫助 2016-11-17 12:19:45
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1.抗體B生物素化后可能會影響其結(jié)合位點，導(dǎo)致其和抗原的結(jié)合能力減弱。 2.還有種可能是抗體A以被動吸附的方式包板后，其構(gòu)型發(fā)生了一定改變影響了其結(jié)合位點。 關(guān)于這兩點的確認(rèn)建議： 1.通過抗Fc酶聯(lián)抗體去評估一下生物素化前后，抗體A和抗原其結(jié)合能力是否發(fā)生改變（抗原少量包被，測試抗體B生物素化前后劑量曲線，通過EC50比較） 2.抗Fc抗體包被酶標(biāo)板條，加入抗體A和直接包被抗體A，然后加抗原，加抗體B，酶聯(lián)抗體顯色，比較一下信號大小 ELISA的信號大小受很多因素影響，一般會有一定波動，一般可以通過調(diào)整酶聯(lián)抗體的濃度把信號維持在一個相對穩(wěn)定的值 |
4樓2016-11-16 17:18:54
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6樓2016-11-19 21:59:15
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