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請教一個關(guān)于葡聚糖凝膠純化蛋白的問題
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我自己表達(dá)的蛋白，分子量80KD左右，先用NI柱純化了一下，下面準(zhǔn)備酶切掉N端的一個標(biāo)簽，切完后651個氨基酸分子量估計(jì)70KD多一點(diǎn)而的樣子，準(zhǔn)備把酶切后直接上葡聚糖凝膠柱純化，問題是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室有的填料是G-75,分離范圍是3kd到80kd,我的分子量有些頂著他的上限了，是不是需要換G-100之類的填料？也就是說對于填料的選擇跟自己的目標(biāo)分子量之間的關(guān)系大概是什么樣子的，謝謝？ 另外我酶切下來的片段似乎不到10kd,然后用的酶是凝血酶，大概30多KD,應(yīng)該不會影響我分離目標(biāo)蛋白吧，謝謝啦 |
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2樓2016-11-18 21:50:49
3樓2016-11-20 12:37:17
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柱子用superdex200,正常情況下酶和標(biāo)簽不影響，但是如果酶切不完全或標(biāo)簽和蛋白折疊到一起去就不好說了。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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cpu104274樓2016-11-20 13:20:27
5樓2016-11-20 21:07:53
6樓2016-11-20 21:35:20
7樓2016-11-20 21:59:39
8樓2016-11-20 22:04:36
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