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漫步青苔新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR相關(guān) 已有4人參與
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之前p的時(shí)候，特異性很好，條帶也很亮，但是最近p一直p不出來，換了新一管同樣的引物和cDNA也是p不出來，第一個(gè)圖是之前p的，第二個(gè)圖是最近p的，實(shí)驗(yàn)新手請(qǐng)大神賜教 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-12-04 22:28:02
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-12-04 22:28:02
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你的cDNA逆轉(zhuǎn)出來多久啦？會(huì)不會(huì)引物和模板存在降解呢？我之前用的phanta max擴(kuò)過cDNA，也是這樣的，后來咨詢了他們技術(shù)，從以下方面做了改進(jìn)，然后就擴(kuò)出了很好看的條帶，你可以參考一下！ 原因 1. 引物特異性差 2. 引物或模板濃度太高 3. 酶或鎂離子濃度偏高 4. 退火溫度偏低 5. 循環(huán)次數(shù)太多 對(duì)策 1. 重新設(shè)計(jì)引物或使用巣式PCR 2. 適當(dāng)降低引物和模板濃度 3. 適當(dāng)降低酶量或鎂離子濃度 4. 提高退火溫度 5. 適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù) |
2樓2016-12-01 09:30:37
jurkat.1640
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3樓2016-12-01 16:09:15
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4樓2016-12-04 21:04:01
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5樓2016-12-04 21:16:01
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7樓2016-12-05 08:45:54
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8樓2016-12-07 10:24:38
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9樓2016-12-07 10:25:15
10樓2016-12-07 13:27:57
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