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漫步青苔新蟲 (初入文壇)
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PCR相關(guān) 已有4人參與
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之前p的時候,特異性很好,條帶也很亮,但是最近p一直p不出來,換了新一管同樣的引物和cDNA也是p不出來,第一個圖是之前p的,第二個圖是最近p的,實驗新手請大神賜教 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
鐵蟲 (小有名氣)
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你的cDNA逆轉(zhuǎn)出來多久啦?會不會引物和模板存在降解呢?我之前用的phanta max擴過cDNA,也是這樣的,后來咨詢了他們技術(shù),從以下方面做了改進(jìn),然后就擴出了很好看的條帶,你可以參考一下! 原因 1. 引物特異性差 2. 引物或模板濃度太高 3. 酶或鎂離子濃度偏高 4. 退火溫度偏低 5. 循環(huán)次數(shù)太多 對策 1. 重新設(shè)計引物或使用巣式PCR 2. 適當(dāng)降低引物和模板濃度 3. 適當(dāng)降低酶量或鎂離子濃度 4. 提高退火溫度 5. 適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù) |

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