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學(xué)習(xí)有助成功銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白測序相關(guān) 已有1人參與
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想問一下做過蛋白N端測序的，用島津的PPSQ-31B測序，樣品前處理是怎么樣的？能不能提供一份詳細的步驟和說明，目前只知道可以電泳后轉(zhuǎn)印，但是具體怎么做的完全不了解，測序都可以對哪些處理樣品進行上樣分析？還希望做過的給提供個文本說明，越詳細越好，感激不盡。另實驗室有個伯樂的快速轉(zhuǎn)印系列，沒用過…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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1、N端測序（PPSQ系列儀器），可以接受3種狀態(tài)的樣品：PVDF膜；液體；固體 2、各種狀態(tài)樣品要求不一樣: PVDF形式的：要求電泳前的樣品，可以是混合樣，但要求自己的測序目的條帶要單一，無交叉條帶干擾； 液體形式的：樣品要求是純品 95%以上，緩沖介質(zhì)要求是水或者揮發(fā)性液體； 固體形式的：樣品要求純度95%以上，固體中出目標物以外，無其他雜志，如賦形劑，鹽分介質(zhì)等。 3、如果樣品不能滿足上面狀態(tài)，很多公司也是可以幫你完成樣品除雜，提純的。可以聯(lián)系：北京農(nóng)業(yè)生物檢測中心 |
2樓2017-01-16 17:34:38
biotpack2 
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- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
| 首先使用1D或者2D膠將蛋白進行分離。接著把蛋白膠上的樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；注意不要使用硝酸纖維素膜。在此過程中請佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對測序結(jié)果的影響。轉(zhuǎn)膜完成后，可以使用考馬斯亮藍或者立春紅對PVDF膜進行染色；注意不要使用銀染的方法進行染色。染色完成之后，可以使用雙蒸水對PVDF膜進行清洗。如果轉(zhuǎn)膜的緩沖液中含有甘氨酸，需要對PVDF膜進行多次沖洗，以避免甘氨酸對后續(xù)分析的影響。PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的解剖刀將靶蛋白條帶切下。在蛋白量允許的情況下，可以準備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量。以上就是蛋白N端測序樣品制備的簡要過程。 |
3樓2017-10-02 16:19:48
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