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學(xué)習(xí)有助成功銅蟲 (小有名氣)
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蛋白測序相關(guān) 已有1人參與
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想問一下做過蛋白N端測序的,用島津的PPSQ-31B測序,樣品前處理是怎么樣的?能不能提供一份詳細(xì)的步驟和說明,目前只知道可以電泳后轉(zhuǎn)印,但是具體怎么做的完全不了解,測序都可以對哪些處理樣品進(jìn)行上樣分析?還希望做過的給提供個(gè)文本說明,越詳細(xì)越好,感激不盡。另實(shí)驗(yàn)室有個(gè)伯樂的快速轉(zhuǎn)印系列,沒用過…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
捐助貴賓 (小有名氣)
| 首先使用1D或者2D膠將蛋白進(jìn)行分離。接著把蛋白膠上的樣品轉(zhuǎn)移至PVDF膜上;注意不要使用硝酸纖維素膜。在此過程中請佩戴手套和頭套,避免自身角蛋白對測序結(jié)果的影響。轉(zhuǎn)膜完成后,可以使用考馬斯亮藍(lán)或者立春紅對PVDF膜進(jìn)行染色;注意不要使用銀染的方法進(jìn)行染色。染色完成之后,可以使用雙蒸水對PVDF膜進(jìn)行清洗。如果轉(zhuǎn)膜的緩沖液中含有甘氨酸,需要對PVDF膜進(jìn)行多次沖洗,以避免甘氨酸對后續(xù)分析的影響。PVDF膜染色后,靶條帶清晰可見,用潔凈的解剖刀將靶蛋白條帶切下。在蛋白量允許的情況下,可以準(zhǔn)備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量。以上就是蛋白N端測序樣品制備的簡要過程。 |
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1、N端測序(PPSQ系列儀器),可以接受3種狀態(tài)的樣品:PVDF膜;液體;固體 2、各種狀態(tài)樣品要求不一樣: PVDF形式的:要求電泳前的樣品,可以是混合樣,但要求自己的測序目的條帶要單一,無交叉條帶干擾; 液體形式的:樣品要求是純品 95%以上,緩沖介質(zhì)要求是水或者揮發(fā)性液體; 固體形式的:樣品要求純度95%以上,固體中出目標(biāo)物以外,無其他雜志,如賦形劑,鹽分介質(zhì)等。 3、如果樣品不能滿足上面狀態(tài),很多公司也是可以幫你完成樣品除雜,提純的?梢月(lián)系:北京農(nóng)業(yè)生物檢測中心 |
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