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ljf0814銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒稀釋問(wèn)題求助！ 已有6人參與
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| 初次接觸絕對(duì)定量PCR，要用質(zhì)粒做標(biāo)準(zhǔn)品，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)計(jì)算后我的提取的質(zhì)粒拷貝數(shù)為79205720169/ul，老師讓我把質(zhì)粒稀釋成10的8次方個(gè)拷貝/ul到10個(gè)拷貝/ul，8個(gè)梯度，而且要很精確很，一個(gè)都不能差。我想了一下，感覺(jué)實(shí)在做不到那么精確，請(qǐng)問(wèn)這樣該如何稀釋?zhuān)恐x謝各位大神！ |
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絕對(duì)定量，標(biāo)準(zhǔn)品確實(shí)需要精確稀釋?zhuān)驗(yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品是用來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，用來(lái)計(jì)算拷貝數(shù)的，肯定要準(zhǔn)。首先你要換算成科學(xué)計(jì)算法，你這個(gè)是79.2*1E9(10的九次方的意思）,然后稀釋79.2倍，取5微升質(zhì)粒，加391微升TE buffer(如果用水的話穩(wěn)定性很差），這就變成了1*1E9（10的九次方）。然后你取5微升質(zhì)粒，加入45微升的TE buffer，稀釋成1*1E8（10的八次方）。照此稀釋。 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)程，一定要記著加完后，讓溶液靜置五分鐘，分子充分運(yùn)動(dòng)混合均一，一定要帶手套，找一個(gè)相對(duì)安靜沒(méi)有認(rèn)來(lái)回走動(dòng)的地方，來(lái)做這個(gè)事情，每稀釋一個(gè)濃度注意換一次手套。希望能夠幫助你。 |
11樓2016-12-14 20:10:42
許彥
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4樓2016-12-08 22:14:51
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西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-12-09 07:31:18
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-12-09 07:31:18
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差不多就行。個(gè)人建議10ul+90ul這樣稀釋?zhuān)鹗帲x心。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2016-12-08 17:12:18
ljf0814
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10樓2016-12-12 10:26:30
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15樓2016-12-15 08:03:46
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3樓2016-12-08 17:18:36
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5樓2016-12-08 22:41:07
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樓主問(wèn)一下，質(zhì)粒拷貝數(shù)是怎么算的？能直接測(cè)嘛？我只知道測(cè)質(zhì)粒的濃度，單位是ng\ul 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
9樓2016-12-11 23:47:59
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