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long900518新蟲 (初入文壇)
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[求助]
western blot法檢測(cè)PKA如何選擇抗體 急�。�！謝謝
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| 因畢業(yè)需要做實(shí)驗(yàn)，從未接觸過實(shí)驗(yàn)，望高手幫忙！ 實(shí)驗(yàn)所需檢測(cè)指標(biāo)：western blot法檢測(cè)PKA 取大鼠海馬組織，提取總蛋白并用BCA法測(cè)定蛋白濃度。各樣本蛋白上樣量為12ug，經(jīng)12%SDS-PAGE積層膠80v，分離膠120v（恒壓）電泳，300mA(恒流)4℃轉(zhuǎn)膜2.5h。用5%TBST-脫脂奶粉封閉2h，后加入兔抗PKAc單抗（1：2500）、兔抗β-action(1:600)4℃過夜。Ⅱ抗孵育1h，TBST洗5min x 3次。經(jīng)ECL發(fā)光顯影，曝光后將顯影圖像掃描至電腦進(jìn)行分析。結(jié)果以目標(biāo)條帶的吸光度A值與同一樣本β-action蛋白A值的比值表示。 可是不知如何選擇抗體，望大神幫忙！萬分感謝！ |
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