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long900518新蟲 (初入文壇)
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[求助]
western blot法檢測PKA如何選擇抗體 急!!謝謝
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| 因畢業(yè)需要做實驗,從未接觸過實驗,望高手幫忙! 實驗所需檢測指標(biāo):western blot法檢測PKA 取大鼠海馬組織,提取總蛋白并用BCA法測定蛋白濃度。各樣本蛋白上樣量為12ug,經(jīng)12%SDS-PAGE積層膠80v,分離膠120v(恒壓)電泳,300mA(恒流)4℃轉(zhuǎn)膜2.5h。用5%TBST-脫脂奶粉封閉2h,后加入兔抗PKAc單抗(1:2500)、兔抗β-action(1:600)4℃過夜。Ⅱ抗孵育1h,TBST洗5min x 3次。經(jīng)ECL發(fā)光顯影,曝光后將顯影圖像掃描至電腦進行分析。結(jié)果以目標(biāo)條帶的吸光度A值與同一樣本β-action蛋白A值的比值表示。 可是不知如何選擇抗體,望大神幫忙!萬分感謝! |
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